產(chǎn)品名稱：腸道集聚性大腸埃希氏菌 EAEC 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
英文名稱：Multiplex PCR Detection Kit for Enteroaggregative E. coli (Fluorescent Probe Assays)
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 規(guī)格 |
| FZ018BF2 | 48 測試/盒 |
產(chǎn)品簡介：本試劑盒僅適用于食品樣本中腸道集聚性大腸埃希氏菌 EAEC 的定性檢測。
檢測原理：基于 Real Time PCR 技術(shù)，利用針對腸桿菌科的 16S rRNA 基因和 EAEC 的毒力基因astA、aggR、pic 設(shè)計(jì)的引物、熒光探針以及其他反應(yīng)優(yōu)化配置所需試劑，加入待檢樣品的核酸即可進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。在發(fā)生擴(kuò)增過程中，熒光探針與目的基因片段結(jié)合，可被 Taq 酶分解并產(chǎn)生熒光信號，此時熒光定量 PCR 儀可識別該熒光信號，同時根據(jù)其強(qiáng)弱變化繪制出相應(yīng)的實(shí)時擴(kuò)增曲線，進(jìn)而判定腸道集聚性大腸埃希氏菌 EAEC 的類型。
astA、aggR、pic、16S rRNA 基因分別對應(yīng)熒光報(bào)告基團(tuán) FAM、VIC、Cy5、ROX。
腸道集聚性大腸埃希氏菌 EAEC 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分：
儲存條件與保質(zhì)期：-20℃避光儲存，有效期為 12 個月，避免反復(fù)凍融。
靈敏度：單通道最低檢驗(yàn)限達(dá)到 100 CFU/Test
所需其他材料和適用儀器：單熒光定量 PCR 儀（具有能夠檢測 FAM、VIC、Cy5、ROX 標(biāo)記的熒光通道）、高速離心機(jī)、移液器、移液槍頭及離心管等。
腸道集聚性大腸埃希氏菌 EAEC 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南：
1，樣品前處理
1) 參照 GB 《4789.6?2016》，使用 1μL 接種環(huán)刮取新鮮培養(yǎng)的待鑒定的可疑菌落到含 30 μL 裂解液的無菌離心管中，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱 10 min；
2) 12000 r/min 離心 15 min，上清即為粗提的 DNA，可轉(zhuǎn)移至 0.2 mL 無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。也可以選擇商業(yè)化的細(xì)菌基因組提取試劑盒進(jìn)行提取。
2, 加樣、反應(yīng)
1) 按照需求取 n 個 PCR 反應(yīng)管（n=1 管陰性對照+待檢測樣品數(shù)+1 管陽性對照），從試劑盒中取出預(yù)混液，充分融化，渦旋后短暫離心，以上每管加入 20 μL 預(yù)混液，待用。
2) 向上述 n 個反應(yīng)管中分別加入陰性對照、待測樣品 DNA、陽性對照各 5 μL，總反應(yīng)體積為 25 μL。蓋緊管蓋，短暫離心，立即進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。
3) PCR 反應(yīng)體系為 25 μL，取 FAM、VIC、Cy5、ROX 檢測通道，在反應(yīng)階段 2 中60 ℃時收集熒光信號，具體程序如下：
| 反應(yīng)階段 | 溫度 | 時間 | 信號收集 | 循環(huán)數(shù) |
| 1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
| 2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
| 60°C | 40 sec | ? |
3, 結(jié)果：一般情況下，可通過軟件自動設(shè)定的基線、閾值等直接讀取檢測結(jié)果。如需調(diào)整，可根據(jù)所使用儀器的自身情況（如噪聲等）以及選取的不同熒光通道進(jìn)行調(diào)整。
1) 質(zhì)量控制：陰性對照未出現(xiàn)明顯的 S 型擴(kuò)增曲線或 Ct 值＞37，陽性對照出現(xiàn) S 型擴(kuò)增曲線且其 Ct 值＜30。若陰陽性對照不同時滿足上述條件，則本次檢測結(jié)果無效，應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
2) 結(jié)果判讀：（根據(jù)反應(yīng)所得 Ct 值判讀，具體見下表：）
| Ct值 | 每個基因判讀結(jié)果 |
| ≤35 | 對應(yīng)的基因陽性。 |
| 35~37 | 建議重新檢測，若復(fù)測結(jié)果Ct≥37，則對應(yīng)的基因陰性，反之為陽性。 |
| ≥37 | 對應(yīng)的基因陰性。 |
? astA 和 pic 基因可在細(xì)菌間轉(zhuǎn)移，當(dāng)與其他 DEC 毒力基因檢測結(jié)果同時陽性時，則 astA 和 pic 基因不作為型別判定依據(jù)。
? 陰性對照反應(yīng) 16S rRNA 基因可能會有弱陽性現(xiàn)象，不作為陽性結(jié)果判定依據(jù)。
? 多重 qPCR 檢測可能出現(xiàn)不同熒光通道之間競爭抑制的問題，單基因分析時適當(dāng)調(diào)整閾值線。
更多實(shí)時熒光PCR檢測試劑盒(食源性致病菌檢測系列) 產(chǎn)品列表：
| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 用途 |
| FZ001BF2 | 銅綠假單胞菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 包裝飲用水等水體中銅綠假單胞菌的定性檢測 |
| FZ002BF2 | 糞鏈球菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 包裝飲用水等水體中糞鏈球菌(EF)的定性檢測 |
| FZ003BF2 | 產(chǎn)氣莢膜梭菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品和水體中產(chǎn)氣莢膜梭菌的定性檢測 |
| FZ004BF2 | 金黃色葡萄球菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品樣本或可疑菌落中金黃色葡萄球菌的檢測 |
| FZ005BF2 | 沙門氏菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中沙門氏菌的檢測 |
| FZ006BF2 | 志賀氏菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中志賀氏菌的定性檢測 |
| FZ007BF2 | 單增李斯特氏菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中單增李斯特氏菌的檢測 |
| FZ008BF2 | 副溶血性弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中副溶血性弧菌的定性檢測 |
| FZ009BF2 | 大腸埃希氏菌O157:H7核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中大腸埃希氏菌O157:H7 的檢測 |
| FZ010BF2 | 阪崎腸桿菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中阪崎克羅諾桿菌的檢測 |
| FZ011BF2 | 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的檢測 |
| FZ012BF2 | 布魯氏菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中布魯氏菌的檢測 |
| FZ013BF2 | 溶藻弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品、水產(chǎn)樣本中溶藻弧菌的檢測 |
| FZ014BF2 | 創(chuàng)傷弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中創(chuàng)傷弧菌的檢測 |
| FZ015BF2 | 嗜肺軍團(tuán)菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于飲用水、非飲用水、公共場所環(huán)境樣本中嗜肺軍團(tuán)菌的檢測 |
| FZ016BF2 | 唐菖蒲伯克霍爾德氏菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 于食品中唐菖蒲伯克霍爾德氏菌的定性檢測 |
