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隨著人們生活水平的提高，我國乳制品行業(yè)也在快速發(fā)展，因此乳制品的食品安全日益成為公眾關(guān)注的焦點。單核細胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)簡稱單增李斯特菌，是牛奶和乳制品中威脅人類健康的主要病原菌之一，也國際上公認的李斯特菌十個菌株中唯一能引起嚴重食物中毒的菌株。該菌在冰箱冷藏室內(nèi)這種較低溫度的環(huán)境下長時間生長繁殖，對廣大的奶制品消費群體產(chǎn)生潛在的健康威脅，因此，必須對其檢測加以重視。
廣東環(huán)凱微生物科技有限公司長期從事微生物控制和檢測的相關(guān)研究，是我國最早研究、開發(fā)食品微生物安全檢測產(chǎn)品的廠家之一，對微生物檢測試劑有著成熟的研發(fā)及生產(chǎn)經(jīng)驗。我公司針對目前乳制品行業(yè)及質(zhì)量監(jiān)測單位對單增李斯特菌快速檢測的需求及情況，特別從英國公司Microgen Bioproducts引進了HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統(tǒng)，使得單增李斯特菌檢驗方式較之前有很大的改進，使得技術(shù)操作人員能更準確、快捷的檢測出目標菌。
HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統(tǒng)（也稱為Microgen Listeria-ID鑒定系統(tǒng)），相對于傳統(tǒng)的生理生化檢驗， 具有三大特點。
1）操作方便：無需配制溶液或試劑，占用體積小。
2）反應(yīng)時間短：接種后的鑒定條培養(yǎng)18-24小時后通過肉眼可見的顏色變化記錄結(jié)果（無需額外添加任何試劑）
3）判定簡單快速：無需對照相關(guān)書籍或標準進行菌株鑒別判定，通過購買產(chǎn)品后贈送的Microgen鑒定系統(tǒng)軟件分析即可得到鑒定結(jié)果。
其創(chuàng)新性在于將可疑菌株產(chǎn)生的生化反應(yīng)與菌種生化反應(yīng)數(shù)據(jù)庫中的大量菌株的生化反應(yīng)結(jié)果進行對比，依靠統(tǒng)計學(xué)原理，對少數(shù)由細小表達突變或?qū)嶒灢僮饕蛩貙?dǎo)致的不確定結(jié)果進行合理判斷，最終從數(shù)據(jù)庫中調(diào)出可能性最大的菌株數(shù)據(jù)與其進行匹配，避免了傳統(tǒng)方法中由菌株因個別實驗結(jié)果差異導(dǎo)致的結(jié)果無法判定。
目前的分子學(xué)方法，雖然在操作上十分快速，但判定依據(jù)不明確，生物和技術(shù)上的變化性直接限制了分子分型方法的可重復(fù)性，而這反過來限制了它的分辨力；同時目前成本較高，無法進行推廣普及。
每條Microgen Listeria-ID鑒定條包括11份干燥反應(yīng)底物和1個空管，反應(yīng)底物主要用來檢驗培養(yǎng)物對碳水化合物的利用，空管則用于溶血試驗.
HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統(tǒng)使用方案
以GB 4789.30-2010 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗流程為例（或其他標準的檢驗流程）,將可疑菌落篩選出后，用TSA-YE平板劃線純化。如下圖中的初篩步驟。
國標中涉及到的培養(yǎng)基及試劑可參考
在對可疑菌株進行純化后。圖2紅色方框中的鑒定步驟可用下列鑒定方法進行替代，以達到簡化實驗，減少工作量的目的。
首先，必須確認可疑菌株為李斯特氏菌屬。
1：李斯特氏菌屬鑒定（如實驗安排合理，可當(dāng)天觀察到結(jié)果）
1.1：革蘭氏染色實驗。
1.2：氧化酶實驗。
1.3：觸酶（過氧化氫酶）實驗
1.4：動力實驗（25 ℃和37 ℃）。在圖1中初篩步驟劃線TSA-YE的同時接種半固體瓊脂做動力實驗，通過此步，可在后一天協(xié)同其他實驗共同確定是否是李斯特軍屬。
如仍然不能確定，可使用李斯特氏菌乳膠凝集試劑進行確定。
上述四個步驟的實驗用品不包含在HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統(tǒng)的鑒定條中需另外購置
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
類別 |
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029010 |
革蘭氏染色液 |
10 ml×4瓶 |
盒 |
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029170 |
氧化酶試紙 |
10片/盒 |
盒 |
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029161 |
過氧化氫酶試劑 |
2 mL/支×10 |
盒 |
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026050 |
半固體瓊脂 |
250g |
瓶（干粉） |
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075350A |
半固體瓊脂 |
10 ml×20支 |
盒（管裝） |
|
075350 |
半固體瓊脂 |
20支 |
盒（西林瓶） |
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HM 48 |
李斯特氏菌乳膠凝集試劑盒 |
50 tests |
盒 |
此五個實驗結(jié)果：革蘭氏陽性短桿菌，氧化酶陰性，觸酶陽性，在25℃培養(yǎng)具有動力，但在37℃培養(yǎng)則無動力，可確認其為李斯特氏菌屬。之后，使用HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統(tǒng)對對可疑菌進行進一步鑒定。
2：HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統(tǒng)使用方法
2.1：試劑條使用說明
1）菌懸液制備好后，用無菌滴管加4滴（約100微升）菌懸肉湯至每個反應(yīng)小管；
2）向管12中加入1滴溶血素試劑；
3）用粘性封口膜或鑒定條蓋封口，放至35-37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時。
2.2：結(jié)果觀察
培養(yǎng)結(jié)束后，對應(yīng)反應(yīng)結(jié)果對照表（說明書背面）讀取結(jié)果，填寫在結(jié)果記錄報告單上。
注：溶血素實驗結(jié)果：檢查小管的底部，若覆蓋著一層清晰的血紅細胞，而底部血紅細胞層上方呈現(xiàn)透明的溶液結(jié)果為陰性 ；若底部無清晰的血紅細胞層，上方出現(xiàn)黃褐色的均勻溶液，則結(jié)果為陽性。
2.3：軟件使用
在鑒定結(jié)果記錄表中，所有反應(yīng)都被分配在三元組中（三個反應(yīng)為一組），每個反應(yīng)下面均標有對應(yīng)的數(shù)值1、2、4，將每組中陽性反應(yīng)對應(yīng)的數(shù)值加起來將得到一個四位數(shù)，作為信息代碼（Octal Code），將這個信息代碼輸入Microgen鑒定軟件系統(tǒng)中，系統(tǒng)將顯示出數(shù)據(jù)庫中5個最接近結(jié)果的菌種，從而得到鑒定結(jié)果。
詳細的MID鑒定系統(tǒng)使用方法，參見
總結(jié)：使用該鑒定方案，可以從原來的至少2 天（最長4天）的鑒定時間，縮短到1天（總體李斯特氏菌篩選檢驗的時間由6~10天縮短到5~7天），為企業(yè)的生產(chǎn)爭取了寶貴的時間。
