培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)基礎(chǔ)，微生物實(shí)驗(yàn)室中的關(guān)鍵物料，對(duì)于培養(yǎng)基如何選擇、如何保存、如何配制滅菌以及處理過期的培養(yǎng)基等常見問題該如何處理？下面一起來探討~~~

A1 微生物培養(yǎng)基怎樣選擇？

根據(jù)微生物類別、檢測(cè)方法、實(shí)驗(yàn)室使用習(xí)慣等，通過培養(yǎng)基供應(yīng)商產(chǎn)品目錄或官網(wǎng)如：環(huán)凱微生物官網(wǎng)  http://www.knowper.cn/ 在產(chǎn)品中心進(jìn)入微生物檢測(cè)試劑按產(chǎn)品類別(干粉、顆粒、即用型成品平板培養(yǎng)基、即用型管狀液體/瓶裝/袋裝液體培養(yǎng)基等)或行業(yè)應(yīng)用（食品、藥品、化妝品、一次性衛(wèi)生用品、公共衛(wèi)生、環(huán)保水質(zhì)等）或檢測(cè)用途（菌落總數(shù)、霉菌酵母計(jì)數(shù)、大腸菌群計(jì)數(shù)、沙門氏菌檢驗(yàn)、金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)……）進(jìn)行查詢檢索，再通過中文名稱、英文名稱、使用用途、以及配方對(duì)比等確認(rèn)查詢到的是否為所需產(chǎn)品。如有不確定的，建議根據(jù)配方進(jìn)行核對(duì)選擇，或聯(lián)系技術(shù)支持進(jìn)一步確認(rèn)。

A2 培養(yǎng)基的保存條件有何要求？

1，建議按照產(chǎn)品說明書的要求放置在推薦的儲(chǔ)存條件。儲(chǔ)存條件要求干燥避光沒有具體溫度說明，指的是室溫條件。

2，干粉培養(yǎng)基：包裝設(shè)計(jì)能一定程度上抵御光和濕度，但是建議客戶還是存放在干燥的環(huán)境。干粉培養(yǎng)基是容易吸濕的，所以瓶蓋應(yīng)該盡量保持蓋緊。吸水后的干粉可能導(dǎo)致pH變化并且結(jié)塊。明顯結(jié)塊且不易用藥匙壓碎的干粉培養(yǎng)基不建議繼續(xù)使用，因?yàn)閮?nèi)部化學(xué)成分可能發(fā)生變化。

3，對(duì)于配好的培養(yǎng)基，最適合的溫度是4-12℃且避光保存。裝在密閉容器或密封袋中避免污染和水分流失。含有血、卵黃等高營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基應(yīng)該放在2-8℃ 存放。放入密閉容器前的平板需要保持干燥并且溫度不能太高。否則在密閉容器中產(chǎn)生太多凝結(jié)水會(huì)導(dǎo)致污染。失水過多的瓊脂可能影響微生物生長(zhǎng)，尤其可能影響革蘭氏陰性菌。液體培養(yǎng)基過度失水也會(huì)導(dǎo)致某些成分的沉淀和結(jié)晶。

A3 培養(yǎng)基的有效期如何定義？

未開封使用的培養(yǎng)基，如儲(chǔ)存恰當(dāng)，可參考產(chǎn)品標(biāo)簽和質(zhì)檢報(bào)告上的有效期。

對(duì)于干粉培養(yǎng)基，開瓶后會(huì)頻繁操作并接觸空氣，因此有效期需要重新定義。由于不同實(shí)驗(yàn)室的使用習(xí)慣和儲(chǔ)存條件不同，建議客戶進(jìn)行開瓶有效期驗(yàn)證，規(guī)定自己的開瓶有效期。

配制好的培養(yǎng)基，有效期關(guān)系到基礎(chǔ)成分、配方、配制過程是否合適、滅菌條件、包裝、儲(chǔ)存條件。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)該對(duì)不同培養(yǎng)基特有的配制、包裝、和儲(chǔ)存條件進(jìn)行驗(yàn)證，以規(guī)定自己的配制有效期。具體可參考中國(guó)藥典培養(yǎng)基適用性、GB4789.28-2013、ISO/TS 11133。

A4 培養(yǎng)基配制是否都需要高壓蒸汽滅菌？

培養(yǎng)基配制方法，我們建議首先參考產(chǎn)品說明書上的配制、滅菌操作說明執(zhí)行。

含有瓊脂的干粉培養(yǎng)基需要加熱煮沸，因?yàn)榄傊娜茳c(diǎn)在96°C左右。需要保證各成分充分混勻。熱水溶解無法代替加熱煮沸。培養(yǎng)基未煮沸狀態(tài)為渾濁，隨著加熱煮沸，顆粒溶解，培養(yǎng)基會(huì)變澄清，且不含有塊狀。一般培養(yǎng)基沸騰后，觀察到澄清，且沒有明顯的不溶塊狀或膠狀物即可。

有些培養(yǎng)基含有溫度敏感的成分，不能高壓滅菌，因此在操作上需要格外注意，需要參考說明書的具體操作。

A5 培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌121℃滅菌15分鐘，是指滅菌的過程時(shí)長(zhǎng)嗎？

培養(yǎng)基說明書中121℃滅菌15分鐘是指高壓蒸汽滅菌法，在溫度達(dá)到121℃，持續(xù)滅菌15min。我們建議首先確認(rèn)滅菌設(shè)備的原理為高壓蒸汽滅菌法，而且滅菌過程是符合相關(guān)滅菌效果驗(yàn)證的，以確保培養(yǎng)基得到有效滅菌。

A6 VRBA培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)配制只需煮沸2min不用高壓滅菌，那能否采用高壓滅菌鍋100℃加熱30分鐘或121℃15分鐘方式制備？

建議按標(biāo)準(zhǔn)配制方法使用，如需采用其他制備方法，如：高壓滅菌鍋100℃加熱30分鐘或121℃ 15分鐘方式制備，實(shí)驗(yàn)室需驗(yàn)證高壓滅菌法替代煮沸法可行性，驗(yàn)證方案和操作可參考文獻(xiàn)《結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂配制中煮沸與高壓滅菌效果比較》。

A7 RV沙門菌增菌培養(yǎng)基115℃滅菌15分鐘，滅菌驗(yàn)證F0值小于8，怎么辦？

115℃滅菌15min的并不是一個(gè)過度滅菌法。雖說該程序不是過度殺滅程序，但是也足夠殺滅大多數(shù)的微生物，具有很大的安全系數(shù)。因此，綜合培養(yǎng)基成分和質(zhì)量性能的滅菌要求，建議該滅菌程序驗(yàn)證內(nèi)容如下：

1) 115℃ 15min空載熱分布：可接受標(biāo)準(zhǔn)（參考PDA TM01及EN285/GB8599）：溫度范圍所有熱電偶115-117℃；滅菌階段同一時(shí)刻各熱電偶之間差值≤2℃；溫度控制探頭與附近熱電偶誤差≤1.0℃。

2) 115℃ 15min負(fù)載熱分布（最小及最大裝載）：可接受標(biāo)準(zhǔn)：同空載。

3) BI挑戰(zhàn)（采用MESA SASU/6 BI）：布點(diǎn)同熱分布，可接受標(biāo)準(zhǔn)，BI培養(yǎng)結(jié)果陰性，陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性。

A8 微生物檢驗(yàn)用培養(yǎng)基過期如何處理？

微生物檢驗(yàn)用培養(yǎng)基過期物不在《國(guó)家危險(xiǎn)廢物名錄》中，參考廠家提供的培養(yǎng)基物料安全數(shù)據(jù)，明確需處理的培養(yǎng)基是否含腐蝕性、毒性、易燃性、反應(yīng)性成分。如：營(yíng)養(yǎng)瓊脂成分為蛋白胨、牛肉粉、氯化鈉、瓊脂，都是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，沒有任何危害成分，不需要處理的，當(dāng)做一般垃圾處理就可以；如：氰化鉀生化管中含?；锴杌洕舛日急葹槿f分之一，丟棄前需于通風(fēng)櫥中將氰化鉀生化管全部打開鋁蓋膠塞將氰化鉀培養(yǎng)基和瓶子都浸泡到去毒液（40%氫氧化鉀溶液，加入少許硫酸亞鐵）中4小時(shí)后降低處理即可按固廢處理。

對(duì)于含?；锍煞值呐囵B(yǎng)基，建議統(tǒng)一交給專業(yè)廢棄物處理企業(yè)處理。

A9 過期培養(yǎng)基沒有結(jié)塊受潮是否還能使用？

過期培養(yǎng)基不建議使用。如特殊情況需使用，建議使用前做性能驗(yàn)證，確定過期培養(yǎng)基性能仍能滿足試驗(yàn)要求。

A10 培養(yǎng)基配方中的胰蛋白胨，酪蛋白胨，胰酪胨是不是同一種培養(yǎng)基成分?

胰蛋白胨（國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)） 是一種優(yōu)質(zhì)蛋白胨，是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化，濃縮干燥而成的淺黃色粉末。具有色淺、易溶、透明、無沉淀等良好的物理性狀。含有豐富的氮源、氨基酸等，可配制各種微生物培養(yǎng)基，用于細(xì)菌的培養(yǎng)、分離、增殖、鑒定，以及無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基、厭氧菌培養(yǎng)基等細(xì)菌生化特性試驗(yàn)用培養(yǎng)基的配置。

酪蛋白胨（胰酪胨）Tryptone又叫胰蛋白胨（進(jìn)口），又稱胰酪蛋白胨（Casein Tryptone）、胰酶消化酪蛋白（Pancreatic digest of casein），胰酶水解酪蛋白、胰酶水解酪素、胰酶水解干酪素等。是采用酪蛋白為原料，經(jīng)過消化、脫色、過濾、濃縮、噴霧干燥而得到的一種淺黃色至類白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黃色。酪蛋白又稱干酪素是從牛奶中提取的一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高的磷蛋白，是生產(chǎn)蛋白胨常用的原料。用此原料生產(chǎn)的蛋白胨，其氨基酸比較齊全，特別是色氨酸的含量比較高。所以它在細(xì)菌生化試驗(yàn)中最適宜于做靛基質(zhì)和糖發(fā)酵試驗(yàn)。但它缺乏胱氨酸、蛋氨酸等含硫氨基酸，故不適宜做硫化氫試驗(yàn)。

總的來說，胰蛋白胨、酪蛋白胨、胰酪胨是否同種物料，主要看它們生產(chǎn)所用起始物料和水解工藝是否一致，如果一致，那就是同種物料；否則，不是同種物料。