微生物培養(yǎng)基十大問答集錦
發(fā)布時間：2023-12-27 瀏覽次數(shù)：955
培養(yǎng)基是微生物試驗基礎，微生物實驗室中的關鍵物料，對于培養(yǎng)基如何選擇、如何保存、如何配制滅菌以及處理過期的培養(yǎng)基等常見問題該如何處理？下面一起來探討~~~
A1 微生物培養(yǎng)基怎樣選擇？
根據(jù)微生物類別、檢測方法、實驗室使用習慣等，通過培養(yǎng)基供應商產(chǎn)品目錄或官網(wǎng)如：環(huán)凱微生物官網(wǎng) http://www.knowper.cn/ 在產(chǎn)品中心進入微生物檢測試劑按產(chǎn)品類別(干粉、顆粒、即用型成品平板培養(yǎng)基、即用型管狀液體/瓶裝/袋裝液體培養(yǎng)基等)或行業(yè)應用（食品、藥品、化妝品、一次性衛(wèi)生用品、公共衛(wèi)生、環(huán)保水質等）或檢測用途（菌落總數(shù)、霉菌酵母計數(shù)、大腸菌群計數(shù)、沙門氏菌檢驗、金黃色葡萄球菌檢驗……）進行查詢檢索，再通過中文名稱、英文名稱、使用用途、以及配方對比等確認查詢到的是否為所需產(chǎn)品。如有不確定的，建議根據(jù)配方進行核對選擇，或聯(lián)系技術支持進一步確認。
A2 培養(yǎng)基的保存條件有何要求？
1，建議按照產(chǎn)品說明書的要求放置在推薦的儲存條件。儲存條件要求干燥避光沒有具體溫度說明，指的是室溫條件。
2，干粉培養(yǎng)基：包裝設計能一定程度上抵御光和濕度，但是建議客戶還是存放在干燥的環(huán)境。干粉培養(yǎng)基是容易吸濕的，所以瓶蓋應該盡量保持蓋緊。吸水后的干粉可能導致pH變化并且結塊。明顯結塊且不易用藥匙壓碎的干粉培養(yǎng)基不建議繼續(xù)使用，因為內部化學成分可能發(fā)生變化。
3，對于配好的培養(yǎng)基，最適合的溫度是4-12℃且避光保存。裝在密閉容器或密封袋中避免污染和水分流失。含有血、卵黃等高營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基應該放在2-8℃ 存放。放入密閉容器前的平板需要保持干燥并且溫度不能太高。否則在密閉容器中產(chǎn)生太多凝結水會導致污染。失水過多的瓊脂可能影響微生物生長，尤其可能影響革蘭氏陰性菌。液體培養(yǎng)基過度失水也會導致某些成分的沉淀和結晶。
A3 培養(yǎng)基的有效期如何定義？
未開封使用的培養(yǎng)基，如儲存恰當，可參考產(chǎn)品標簽和質檢報告上的有效期。
對于干粉培養(yǎng)基，開瓶后會頻繁操作并接觸空氣，因此有效期需要重新定義。由于不同實驗室的使用習慣和儲存條件不同，建議客戶進行開瓶有效期驗證，規(guī)定自己的開瓶有效期。
配制好的培養(yǎng)基，有效期關系到基礎成分、配方、配制過程是否合適、滅菌條件、包裝、儲存條件。每個實驗室都應該對不同培養(yǎng)基特有的配制、包裝、和儲存條件進行驗證，以規(guī)定自己的配制有效期。具體可參考中國藥典培養(yǎng)基適用性、GB4789.28-2013、ISO/TS 11133。
A4 培養(yǎng)基配制是否都需要高壓蒸汽滅菌？
培養(yǎng)基配制方法，我們建議首先參考產(chǎn)品說明書上的配制、滅菌操作說明執(zhí)行。
含有瓊脂的干粉培養(yǎng)基需要加熱煮沸，因為瓊脂的溶點在96°C左右。需要保證各成分充分混勻。熱水溶解無法代替加熱煮沸。培養(yǎng)基未煮沸狀態(tài)為渾濁，隨著加熱煮沸，顆粒溶解，培養(yǎng)基會變澄清，且不含有塊狀。一般培養(yǎng)基沸騰后，觀察到澄清，且沒有明顯的不溶塊狀或膠狀物即可。
有些培養(yǎng)基含有溫度敏感的成分，不能高壓滅菌，因此在操作上需要格外注意，需要參考說明書的具體操作。
A5 培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌121℃滅菌15分鐘，是指滅菌的過程時長嗎？
培養(yǎng)基說明書中121℃滅菌15分鐘是指高壓蒸汽滅菌法，在溫度達到121℃，持續(xù)滅菌15min。我們建議首先確認滅菌設備的原理為高壓蒸汽滅菌法，而且滅菌過程是符合相關滅菌效果驗證的，以確保培養(yǎng)基得到有效滅菌。
A6 VRBA培養(yǎng)基標準配制只需煮沸2min不用高壓滅菌，那能否采用高壓滅菌鍋100℃加熱30分鐘或121℃15分鐘方式制備？
建議按標準配制方法使用，如需采用其他制備方法，如：高壓滅菌鍋100℃加熱30分鐘或121℃ 15分鐘方式制備，實驗室需驗證高壓滅菌法替代煮沸法可行性，驗證方案和操作可參考文獻《結晶紫中性紅膽鹽瓊脂配制中煮沸與高壓滅菌效果比較》。
A7 RV沙門菌增菌培養(yǎng)基115℃滅菌15分鐘，滅菌驗證F0值小于8，怎么辦？
115℃滅菌15min的并不是一個過度滅菌法。雖說該程序不是過度殺滅程序，但是也足夠殺滅大多數(shù)的微生物，具有很大的安全系數(shù)。因此，綜合培養(yǎng)基成分和質量性能的滅菌要求，建議該滅菌程序驗證內容如下：
1) 115℃ 15min空載熱分布：可接受標準（參考PDA TM01及EN285/GB8599）：溫度范圍所有熱電偶115-117℃；滅菌階段同一時刻各熱電偶之間差值≤2℃；溫度控制探頭與附近熱電偶誤差≤1.0℃。
2) 115℃ 15min負載熱分布（最小及最大裝載）：可接受標準：同空載。
3) BI挑戰(zhàn)（采用MESA SASU/6 BI）：布點同熱分布，可接受標準，BI培養(yǎng)結果陰性，陽性對照陽性。
A8 微生物檢驗用培養(yǎng)基過期如何處理？
微生物檢驗用培養(yǎng)基過期物不在《國家危險廢物名錄》中，參考廠家提供的培養(yǎng)基物料安全數(shù)據(jù)，明確需處理的培養(yǎng)基是否含腐蝕性、毒性、易燃性、反應性成分。如：營養(yǎng)瓊脂成分為蛋白胨、牛肉粉、氯化鈉、瓊脂，都是營養(yǎng)物質，沒有任何危害成分，不需要處理的，當做一般垃圾處理就可以；如：氰化鉀生化管中含?；锴杌洕舛日急葹槿f分之一，丟棄前需于通風櫥中將氰化鉀生化管全部打開鋁蓋膠塞將氰化鉀培養(yǎng)基和瓶子都浸泡到去毒液（40%氫氧化鉀溶液，加入少許硫酸亞鐵）中4小時后降低處理即可按固廢處理。
對于含危化物成分的培養(yǎng)基，建議統(tǒng)一交給專業(yè)廢棄物處理企業(yè)處理。
A9 過期培養(yǎng)基沒有結塊受潮是否還能使用？
過期培養(yǎng)基不建議使用。如特殊情況需使用，建議使用前做性能驗證，確定過期培養(yǎng)基性能仍能滿足試驗要求。
A10 培養(yǎng)基配方中的胰蛋白胨，酪蛋白胨，胰酪胨是不是同一種培養(yǎng)基成分?
胰蛋白胨（國內標準） 是一種優(yōu)質蛋白胨，是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化，濃縮干燥而成的淺黃色粉末。具有色淺、易溶、透明、無沉淀等良好的物理性狀。含有豐富的氮源、氨基酸等，可配制各種微生物培養(yǎng)基，用于細菌的培養(yǎng)、分離、增殖、鑒定，以及無菌試驗培養(yǎng)基、厭氧菌培養(yǎng)基等細菌生化特性試驗用培養(yǎng)基的配置。
酪蛋白胨（胰酪胨）Tryptone又叫胰蛋白胨（進口），又稱胰酪蛋白胨（Casein Tryptone）、胰酶消化酪蛋白（Pancreatic digest of casein），胰酶水解酪蛋白、胰酶水解酪素、胰酶水解干酪素等。是采用酪蛋白為原料，經(jīng)過消化、脫色、過濾、濃縮、噴霧干燥而得到的一種淺黃色至類白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黃色。酪蛋白又稱干酪素是從牛奶中提取的一種營養(yǎng)價值很高的磷蛋白，是生產(chǎn)蛋白胨常用的原料。用此原料生產(chǎn)的蛋白胨，其氨基酸比較齊全，特別是色氨酸的含量比較高。所以它在細菌生化試驗中最適宜于做靛基質和糖發(fā)酵試驗。但它缺乏胱氨酸、蛋氨酸等含硫氨基酸，故不適宜做硫化氫試驗。
總的來說，胰蛋白胨、酪蛋白胨、胰酪胨是否同種物料，主要看它們生產(chǎn)所用起始物料和水解工藝是否一致，如果一致，那就是同種物料；否則，不是同種物料。
