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體外培養(yǎng)細(xì)胞的常見問題

發(fā)布時(shí)間:2022-06-08    瀏覽次數(shù):1599

問題可能原因建議解決方法
培養(yǎng)液 pH值變化太快CO?張力不對。(1)按培養(yǎng)液中 NaHCO?濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO?濃度,2.0g/L 到 3.7g/L 濃度NaHCO?對應(yīng)CO?濃度為 5% 到10% 。
(2)改用不依賴 CO?培養(yǎng)液。
培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊。松開瓶蓋1/4圈。
NaHCO?緩沖系統(tǒng)緩沖力不足。
培養(yǎng)液中鹽濃度不正確
HEPES緩沖液至10 到25mM終濃度。
在 CO?培養(yǎng)環(huán)境中改用基于 Earle's 鹽配制的培養(yǎng)液,在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用 Hanks 鹽配制的培養(yǎng)液。
細(xì)菌、酵母或真菌污染丟棄培養(yǎng)物。
或用抗生素除菌。
培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀,但 pH 值不變用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿,然后除菌。
冰凍保存培養(yǎng)液將培養(yǎng)液加熱到37℃,搖動(dòng)使其溶解如沉淀仍然存在,丟棄培養(yǎng)液。
培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀,同時(shí)pH發(fā)生變化細(xì)菌或真菌污染丟棄培養(yǎng)物。
或用抗生素除菌。
培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁胰蛋白酶消化過度縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度。
分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。
支原體污染
培養(yǎng)液中無貼壁因子
懸浮細(xì)胞成簇

培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子

支原體污染

蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解釋放 DNA

用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,輕輕吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液。

分離培養(yǎng)物,檢測支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。

用 DNaseⅠ處理細(xì)胞。

原代細(xì) 胞培養(yǎng)物污染原代培養(yǎng)組織在進(jìn)入培養(yǎng)前已污染培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復(fù)沖洗組織。
培養(yǎng)細(xì)胞生長減慢

由于更換不同培養(yǎng)液或血清

比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)。

增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度。

讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液。

換入新鮮配制培養(yǎng)液。

補(bǔ)加谷氨酰胺或生長因子。

用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物。或用抗生素除菌。

血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2周內(nèi)用完。

培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。

培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染試劑保存不當(dāng)

接種細(xì)胞起始濃度太低

細(xì)胞已老化

支原體污染

增加接種細(xì)胞起始濃度。

換用新的保種細(xì)胞。

分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。

培養(yǎng)細(xì)胞死亡
 

培養(yǎng)箱內(nèi)無CO?

培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大

細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷

培養(yǎng)液滲透壓不正確

檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2 

檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度

取新的保存細(xì)胞種

檢測培養(yǎng)液滲透壓。注意∶大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞能耐受滲透壓為260-350 mOsm/kg。加入額外試劑如 HEPES 或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓。

培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積

接種細(xì)胞起始濃度太低

細(xì)胞已老化

支原體污染

換入新鮮培養(yǎng)液

增加接種細(xì)胞起始濃度。

換用新的保種細(xì)胞。

分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。

培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積換入新鮮培養(yǎng)液

 

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