體外培養(yǎng)細(xì)胞的常見問題
發(fā)布時間：2022-06-08 瀏覽次數(shù)：1600
| 問題 | 可能原因 | 建議解決方法 |
| 培養(yǎng)液 pH值變化太快 | CO?張力不對。 | （1）按培養(yǎng)液中 NaHCO?濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO?濃度，2.0g/L 到 3.7g/L 濃度NaHCO?對應(yīng)CO?濃度為 5% 到10% 。 （2）改用不依賴 CO?培養(yǎng)液。 |
| 培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊。 | 松開瓶蓋1/4圈。 | |
| NaHCO?緩沖系統(tǒng)緩沖力不足。 培養(yǎng)液中鹽濃度不正確 | 加HEPES緩沖液至10 到25mM終濃度。 在 CO?培養(yǎng)環(huán)境中改用基于 Earle's 鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用 Hanks 鹽配制的培養(yǎng)液。 | |
| 細(xì)菌、酵母或真菌污染 | 丟棄培養(yǎng)物。 或用抗生素除菌。 | |
| 培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但 pH 值不變 | 用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來 | 用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿，然后除菌。 |
| 冰凍保存培養(yǎng)液 | 將培養(yǎng)液加熱到37℃，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液。 | |
| 培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，同時pH發(fā)生變化 | 細(xì)菌或真菌污染 | 丟棄培養(yǎng)物。 或用抗生素除菌。 |
| 培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁 | 胰蛋白酶消化過度 | 縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。 分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。 |
| 支原體污染 | ||
| 培養(yǎng)液中無貼壁因子 | ||
| 懸浮細(xì)胞成簇 | 培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 支原體污染 蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解釋放 DNA | 用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕輕吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液。 分離培養(yǎng)物，檢測支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。 用 DNaseⅠ處理細(xì)胞。 |
| 原代細(xì) 胞培養(yǎng)物污染 | 原代培養(yǎng)組織在進入培養(yǎng)前已污染 | 培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復(fù)沖洗組織。 |
| 培養(yǎng)細(xì)胞生長減慢 | 由于更換不同培養(yǎng)液或血清 | 比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實驗。 增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度。 讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液。 換入新鮮配制培養(yǎng)液。 補加谷氨酰胺或生長因子。 用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物?；蛴每股爻?。 血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存，并在2周內(nèi)用完。 |
培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。 培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染試劑保存不當(dāng) | ||
接種細(xì)胞起始濃度太低 細(xì)胞已老化 支原體污染 | 增加接種細(xì)胞起始濃度。 換用新的保種細(xì)胞。 分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。 | |
| 培養(yǎng)細(xì)胞死亡 | 培養(yǎng)箱內(nèi)無CO? 培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大 細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷 培養(yǎng)液滲透壓不正確 | 檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2 檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度 取新的保存細(xì)胞種 檢測培養(yǎng)液滲透壓。注意∶大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞能耐受滲透壓為260-350 mOsm/kg。加入額外試劑如 HEPES 或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓。 |
培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積 接種細(xì)胞起始濃度太低 細(xì)胞已老化 支原體污染 | 換入新鮮培養(yǎng)液 增加接種細(xì)胞起始濃度。 換用新的保種細(xì)胞。 分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。 | |
| 培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積 | 換入新鮮培養(yǎng)液 |
