食品微生物檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)常用培養(yǎng)基原理解析
發(fā)布時(shí)間：2020-09-21 瀏覽次數(shù)：14512
沙門氏菌檢驗(yàn)常用培養(yǎng)基如緩沖蛋白胨水、四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）、亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基、HE瓊脂培養(yǎng)基及賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)等原理解析。
?配方中硫代硫酸鈉和碘經(jīng)氧化生成四硫磺酸鈉，它對(duì)大腸菌群有抑制作用，對(duì)沙門氏菌無(wú)影響（因沙門氏菌具有四硫磺酸酶，能分解四硫磺酸鈉，而大腸菌群沒(méi)有這種酶，故生長(zhǎng)受抑制）；
?碳酸鈣為緩沖劑，可使沙門氏菌不致因酸堿度改變面死亡。
?由于配方含碳酸鈣，因此，該培養(yǎng)基配置后的最終pH不在7.0±0.2，而是偏堿性。
四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）
2. 緩沖蛋白胨水（BPW）
?其成分中含有磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉，起緩沖液的作用；
?蛋白胨提供生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)，有利于損傷沙門氏菌的復(fù)蘇。
?配方中亞硫酸鈉可與檸檬酸鉍銨生成亞硫酸鉍，抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和大腸菌群；硫酸亞鐵可產(chǎn)生硫化氫，并與鐵反應(yīng)生成黑色沉淀。
?沙門氏菌在BS上的典型菌落特征：具有金屬光澤的棕色或黑色菌落。但有些菌株形成非典型菌落特征：灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。
?BS平板應(yīng)制備后避光常溫保存，并在24h內(nèi)使用。
亞硫酸鉍瓊脂（BS）菌落特征
4. 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）
?蛋白胨提供碳源和氮源滿足細(xì)菌生長(zhǎng)的需求；乳糖是可發(fā)酵的糖類；亞硒酸氫鈉抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和非沙門氏菌的大多數(shù)革蘭氏陰性腸道菌；磷酸鹽是緩沖劑；L-胱氨酸為還原劑。
?使用過(guò)程中要注意SC培養(yǎng)基不穩(wěn)定，配置時(shí)避免過(guò)度加熱。
亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）
?HE瓊脂培養(yǎng)基配方中膽鹽、去氧膽酸鈉、溴麝香草酚蘭等成分可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)；酸性復(fù)紅作為酸堿指示劑的同時(shí)，也可抑制陽(yáng)性菌，但對(duì)陰性腸道菌無(wú)抑制作用，選擇性較弱。硫代硫酸鈉可被細(xì)菌還原產(chǎn)生硫化氫，與檸檬酸鐵銨反應(yīng)生成黑色硫化亞鐵。
?菌落特征：藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌落中心黑色或全幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。
HE瓊脂菌落特征——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028
?XLD瓊脂培養(yǎng)基配方中木糖、乳糖和蔗糖成分作為可發(fā)酵的碳源，除志賀氏菌外，其他大多數(shù)腸桿菌均能發(fā)酵木糖；沙門氏菌發(fā)酵木糖產(chǎn)酸，形成酸性環(huán)境有利于產(chǎn)生脫羧酶使賴氨酸脫羧，從而使培養(yǎng)基的pH值升高向堿性轉(zhuǎn)變；在堿性條件下，硫代硫酸鈉及檸 檬酸鐵銨成分與沙門氏菌產(chǎn)生的硫化氫反應(yīng)是的菌落的顏色呈黑色；去氧膽酸鹽成分可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)。
?菌落特征：菌落呈粉紅色,帶或不帶黑色中心,有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心,或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落,帶或不帶黑色中心。如下圖所示：
XLD瓊脂菌落特征——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028
?蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;膽鹽抑制革蘭氏陽(yáng)性菌;選擇性添加劑增強(qiáng)培養(yǎng)基的抑制雜菌的能力;混合色素分別與沙門氏菌和大腸菌群所對(duì)應(yīng)的酶發(fā)生特異性反應(yīng)，水解底物，釋放出顯色基團(tuán)，在淡黃色平板上沙門氏菌產(chǎn)生品紅色的菌落，大腸菌群產(chǎn)生藍(lán)綠色的菌落。如下圖所示：
CRM004 沙門顯色培養(yǎng)基——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028
?蛋白胨、牛肉膏粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì);乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類，其產(chǎn)酸時(shí)通過(guò)酚紅指示劑測(cè)出，酸性呈黃色，堿性呈紅色;硫代硫酸鈉可被某些細(xì)菌還原為硫化氫，與硫酸亞鐵銨中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
三鐵塘
9. 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基
?具有氨基酸脫羧酶的細(xì)菌，能分解氨基酸使其脫羧生成胺（賴氨酸→尸胺）和二氧化碳，使培養(yǎng)基變堿，使指示劑顯示出來(lái)。
?結(jié)果判讀：陽(yáng)性為試驗(yàn)管為綠色-藍(lán)綠色，對(duì)照管變黃色； 陰性為試驗(yàn)管和對(duì)照管均變黃色，或均不變色。
賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)陽(yáng)性
10. 靛基質(zhì)試驗(yàn)（靛基質(zhì)試劑）
?某些細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應(yīng)表現(xiàn)出來(lái)。吲哚與對(duì)二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。
?結(jié)果判讀：陽(yáng)性為滴加靛基質(zhì)試劑后液面立即變玫紅色；陰性為滴加試劑后不變紅色。
靛基質(zhì)試驗(yàn)
11. 尿素酶試驗(yàn)
?具有尿素酶的細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的尿素，產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)呈堿性，酚紅指示劑在pH6.8時(shí)呈黃色，pH8.1呈粉紅色。
?結(jié)果判讀：陽(yáng)性為玫紅色； 陰性為淡橙紅色-淡黃色。
尿素酶試驗(yàn)
12. 氰化鉀利用試驗(yàn)
?氰化鉀是細(xì)菌呼吸酶系統(tǒng)的抑制劑,可與呼吸酶作用使酶失去活性,抑制細(xì)菌的生長(zhǎng),但有的細(xì)菌在一定濃度的氰化鉀存在時(shí)仍能生長(zhǎng),以此鑒別細(xì)菌.。
?結(jié)果判讀：陽(yáng)性為試驗(yàn)管和對(duì)照管都有生長(zhǎng)變渾濁； 陰性為試驗(yàn)管澄清不見(jiàn)生長(zhǎng)，對(duì)照管生長(zhǎng)渾濁。
氰化鉀利用陰性結(jié)果
13. 糖（醇）發(fā)酵試驗(yàn)
?絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖（醇）類作為碳源和能源，但是它們?cè)诜纸馓牵ù迹┑哪芰ι嫌泻艽蟮牟町?，有些?xì)菌能分解某種糖（醇）并產(chǎn)酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和氣體（如氫、甲烷、二氧化碳等）；有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來(lái)斷定。
?（指示劑為溴甲酚紫）結(jié)果判讀：陽(yáng)性為變黃色；陰性為紫色。
甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)
