食品微生物檢驗沙門氏菌檢驗常用培養(yǎng)基原理解析
發(fā)布時間：2020-09-21 瀏覽次數(shù)：14515
沙門氏菌檢驗常用培養(yǎng)基如緩沖蛋白胨水、四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）、亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基、HE瓊脂培養(yǎng)基及賴氨酸脫羧酶試驗、靛基質(zhì)試驗等原理解析。
?配方中硫代硫酸鈉和碘經(jīng)氧化生成四硫磺酸鈉，它對大腸菌群有抑制作用，對沙門氏菌無影響（因沙門氏菌具有四硫磺酸酶，能分解四硫磺酸鈉，而大腸菌群沒有這種酶，故生長受抑制）；
?碳酸鈣為緩沖劑，可使沙門氏菌不致因酸堿度改變面死亡。
?由于配方含碳酸鈣，因此，該培養(yǎng)基配置后的最終pH不在7.0±0.2，而是偏堿性。
四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）
2. 緩沖蛋白胨水（BPW）
?其成分中含有磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉，起緩沖液的作用；
?蛋白胨提供生長營養(yǎng)，有利于損傷沙門氏菌的復蘇。
?配方中亞硫酸鈉可與檸檬酸鉍銨生成亞硫酸鉍，抑制革蘭氏陽性菌和大腸菌群；硫酸亞鐵可產(chǎn)生硫化氫，并與鐵反應生成黑色沉淀。
?沙門氏菌在BS上的典型菌落特征：具有金屬光澤的棕色或黑色菌落。但有些菌株形成非典型菌落特征：灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。
?BS平板應制備后避光常溫保存，并在24h內(nèi)使用。
亞硫酸鉍瓊脂（BS）菌落特征
4. 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）
?蛋白胨提供碳源和氮源滿足細菌生長的需求；乳糖是可發(fā)酵的糖類；亞硒酸氫鈉抑制革蘭氏陽性菌和非沙門氏菌的大多數(shù)革蘭氏陰性腸道菌；磷酸鹽是緩沖劑；L-胱氨酸為還原劑。
?使用過程中要注意SC培養(yǎng)基不穩(wěn)定，配置時避免過度加熱。
亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）
?HE瓊脂培養(yǎng)基配方中膽鹽、去氧膽酸鈉、溴麝香草酚蘭等成分可抑制革蘭氏陽性菌生長；酸性復紅作為酸堿指示劑的同時，也可抑制陽性菌，但對陰性腸道菌無抑制作用，選擇性較弱。硫代硫酸鈉可被細菌還原產(chǎn)生硫化氫，與檸檬酸鐵銨反應生成黑色硫化亞鐵。
?菌落特征：藍綠色或藍色，多數(shù)菌落中心黑色或全幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。
HE瓊脂菌落特征——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028
?XLD瓊脂培養(yǎng)基配方中木糖、乳糖和蔗糖成分作為可發(fā)酵的碳源，除志賀氏菌外，其他大多數(shù)腸桿菌均能發(fā)酵木糖；沙門氏菌發(fā)酵木糖產(chǎn)酸，形成酸性環(huán)境有利于產(chǎn)生脫羧酶使賴氨酸脫羧，從而使培養(yǎng)基的pH值升高向堿性轉變；在堿性條件下，硫代硫酸鈉及檸 檬酸鐵銨成分與沙門氏菌產(chǎn)生的硫化氫反應是的菌落的顏色呈黑色；去氧膽酸鹽成分可抑制革蘭氏陽性菌的生長。
?菌落特征：菌落呈粉紅色,帶或不帶黑色中心,有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心,或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落,帶或不帶黑色中心。如下圖所示：
XLD瓊脂菌落特征——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028
?蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;膽鹽抑制革蘭氏陽性菌;選擇性添加劑增強培養(yǎng)基的抑制雜菌的能力;混合色素分別與沙門氏菌和大腸菌群所對應的酶發(fā)生特異性反應，水解底物，釋放出顯色基團，在淡黃色平板上沙門氏菌產(chǎn)生品紅色的菌落，大腸菌群產(chǎn)生藍綠色的菌落。如下圖所示：
CRM004 沙門顯色培養(yǎng)基——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028
?蛋白胨、牛肉膏粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì);乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類，其產(chǎn)酸時通過酚紅指示劑測出，酸性呈黃色，堿性呈紅色;硫代硫酸鈉可被某些細菌還原為硫化氫，與硫酸亞鐵銨中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
三鐵塘
9. 賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基
?具有氨基酸脫羧酶的細菌，能分解氨基酸使其脫羧生成胺（賴氨酸→尸胺）和二氧化碳，使培養(yǎng)基變堿，使指示劑顯示出來。
?結果判讀：陽性為試驗管為綠色-藍綠色，對照管變黃色； 陰性為試驗管和對照管均變黃色，或均不變色。
賴氨酸脫羧酶試驗陽性
10. 靛基質(zhì)試驗（靛基質(zhì)試劑）
?某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應表現(xiàn)出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。
?結果判讀：陽性為滴加靛基質(zhì)試劑后液面立即變玫紅色；陰性為滴加試劑后不變紅色。
靛基質(zhì)試驗
11. 尿素酶試驗
?具有尿素酶的細菌分解培養(yǎng)基中的尿素，產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)呈堿性，酚紅指示劑在pH6.8時呈黃色，pH8.1呈粉紅色。
?結果判讀：陽性為玫紅色； 陰性為淡橙紅色-淡黃色。
尿素酶試驗
12. 氰化鉀利用試驗
?氰化鉀是細菌呼吸酶系統(tǒng)的抑制劑,可與呼吸酶作用使酶失去活性,抑制細菌的生長,但有的細菌在一定濃度的氰化鉀存在時仍能生長,以此鑒別細菌.。
?結果判讀：陽性為試驗管和對照管都有生長變渾濁； 陰性為試驗管澄清不見生長，對照管生長渾濁。
氰化鉀利用陰性結果
13. 糖（醇）發(fā)酵試驗
?絕大多數(shù)細菌都能利用糖（醇）類作為碳源和能源，但是它們在分解糖（醇）的能力上有很大的差異，有些細菌能分解某種糖（醇）并產(chǎn)酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和氣體（如氫、甲烷、二氧化碳等）；有些細菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來斷定。
?（指示劑為溴甲酚紫）結果判讀：陽性為變黃色；陰性為紫色。
甘露醇發(fā)酵試驗
