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黃曲霉毒素介紹
黃曲霉毒素是一類(lèi)真菌(如黃曲霉和寄生曲霉)的有毒的代謝產(chǎn)物，它們具有很強(qiáng)的致癌性，主要存在于藥材、谷物、堅(jiān)果、棉籽以及動(dòng)物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。其毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氰化物、砷化物和有機(jī)農(nóng)藥的毒性，其中以B1毒性最大。當(dāng)人攝入量大時(shí)，可發(fā)生急性中毒，出現(xiàn)急性肝炎、出血性壞死、肝細(xì)胞脂肪變性和膽管增生。當(dāng)微量持續(xù)攝入，可造成慢性中毒，生長(zhǎng)障礙，引起纖維性病變，致使纖維組織增生。
背景
各級(jí)食品藥品監(jiān)管部門(mén)不斷加大中藥生產(chǎn)流通監(jiān)管力度，努力保持中藥質(zhì)量總體穩(wěn)定。
國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局關(guān)于規(guī)范中藥生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)秩序嚴(yán)厲查處違法違規(guī)行為的通知(國(guó)食藥監(jiān)安[2012]187號(hào)中，要求加強(qiáng)對(duì)重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留、黃曲霉毒素等安全性指標(biāo)的檢測(cè)和控制，切實(shí)保證中藥材質(zhì)量和安全，另要求企業(yè)具備與生產(chǎn)品種相適應(yīng)的檢驗(yàn)設(shè)備和能力，嚴(yán)把質(zhì)量檢驗(yàn)關(guān)?！秶?guó)家藥品安全“十二五”規(guī)劃》，規(guī)劃中明確提出“開(kāi)展藥品快速檢驗(yàn)技術(shù)研究，搭建檢驗(yàn)技術(shù)共享平臺(tái)”、“加快推進(jìn)藥品快速檢驗(yàn)技術(shù)在基層的應(yīng)用，配置快速檢驗(yàn)設(shè)備”、“加強(qiáng)縣級(jí)機(jī)構(gòu)快速檢驗(yàn)?zāi)芰ㄔO(shè)”的要求。
中藥中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法
2010版《藥典》附錄IX V 黃曲霉毒素測(cè)定采用高效液相色譜法，另外增補(bǔ)藥典描述該法檢測(cè)建立增加柱后光化學(xué)衍生法。
原理
樣品經(jīng)甲醇-水提取，提取液經(jīng)過(guò)濾、稀釋?zhuān)瑸V液經(jīng)過(guò)含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和柱層析凈化，黃曲霉毒素交聯(lián)在層析介質(zhì)中的抗體上，此抗體對(duì)黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有專(zhuān)一性，用水將免疫親和柱上雜質(zhì)除去，以甲醇通過(guò)免疫親和柱洗脫，再經(jīng)光化學(xué)衍生器柱后衍生，以提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。
主要試劑及耗材
氣控操作架：含氣泵
黃曲霉毒素免疫親和柱1ml或3ml
光化學(xué)衍生器
玻璃微纖維濾紙 ：直徑11cm、孔徑1.5μm
玻璃試管：直徑12mm，長(zhǎng)75mm，無(wú)熒光特性
注射器：10ml、20ml
檢測(cè)步驟
樣品粉碎——提取——洗脫液進(jìn)樣、親和柱凈化——化學(xué)衍生——檢測(cè)數(shù)值
氣控操作架的使用說(shuō)明：
在樣品粉碎后需要過(guò)親和柱凈化，也就是怎么方便親和柱使用操作的問(wèn)題，氣控操作架能有效地提高這個(gè)環(huán)節(jié)的工作效率：
1.連接組裝好的氣控操作架，將免疫親和柱、注射器針筒與氣控操作架連接;
2.將處理后的溶液上樣;
3.調(diào)節(jié)空氣泵旋鈕以控制流速，使樣液以1-2d/s的速度流出;
4.待樣液完全排干，用去離子水或蒸餾水以2-3d/s的流速洗滌兩次，每次10ml;
5.待液體完全排干，將樣品瓶置于親和柱下方，上樣1ml甲醇以1d/s的速度流出至完全排干。
以上操作步驟是用免疫親和柱--高效液相法檢測(cè)中藥中黃曲霉毒素的必經(jīng)步驟，如使用氣控操作架就能很好的固定親和柱并以可控流速操作，既高效也能使操作誤差減到最小。
使用光化學(xué)衍生器原因
由于黃曲霉具有較強(qiáng)的紫外吸收和產(chǎn)生熒光的特性，因此可以進(jìn)行HPLC-紫外或熒光檢測(cè)，但是同時(shí)黃曲霉毒素中的B1、G1由于其在含水的流動(dòng)相中容易產(chǎn)生熒光淬滅，因此在很多的實(shí)驗(yàn)中都會(huì)采用衍生法測(cè)定黃曲霉毒素。
衍生的方法也很多：有柱前的，柱后的，在線(xiàn)的，由于在線(xiàn)的柱后光化學(xué)衍生有明顯的優(yōu)勢(shì)，所以現(xiàn)在被增補(bǔ)為藥典的微生物檢測(cè)方法，優(yōu)勢(shì)主要在于(無(wú)需任何化學(xué)試劑、對(duì)人員無(wú)傷害;無(wú)需人員直接操作、避免誤差; 無(wú)需擔(dān)心衍生液腐蝕檢測(cè)器)
