潔凈手術(shù)室作為醫(yī)院感染防控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其空氣微生物濃度的穩(wěn)定性直接關(guān)系手術(shù)安全與患者預(yù)后。然而，在實(shí)際運(yùn)行中，因運(yùn)維管理疏漏、人員操作不規(guī)范及凈化空調(diào)系統(tǒng)長(zhǎng)期運(yùn)行導(dǎo)致的過濾器性能衰減等問題，可能引發(fā)潔凈度參數(shù)偏離設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)，增加術(shù)后感染風(fēng)險(xiǎn)。因此，定期開展浮游菌監(jiān)測(cè)是維持潔凈環(huán)境的核心措施之一。

我們推薦使用環(huán)凱牌浮游微生物采樣器（HKM-IIIB）對(duì)手術(shù)室進(jìn)行采樣，HKM-IIIB型浮游微生物采樣器是一種高效的多孔吸入式浮游微生物采樣器。該設(shè)備基于Andersen撞擊原理，等效6級(jí)，撞擊速度達(dá)20m/s，可高效捕獲≥1μm的微生物顆粒，采樣效率≥95%。采集頭口風(fēng)速與潔凈室內(nèi)風(fēng)速一致，確保微生物濃度檢測(cè)的準(zhǔn)確性。采集樣本時(shí)，空氣攜帶顆粒高速撞擊在培養(yǎng)皿內(nèi)的培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)基為細(xì)菌創(chuàng)造了保持活性的最佳環(huán)境，保證了測(cè)定結(jié)果精確可靠。

其核心優(yōu)勢(shì)包括：

1，等速采樣設(shè)計(jì)：采集口風(fēng)速與潔凈室風(fēng)速一致，確保微生物濃度檢測(cè)準(zhǔn)確性；

2，智能功能：3.5寸觸控屏支持采樣量10-6000L、采樣地點(diǎn)代碼等參數(shù)設(shè)置，并通過手機(jī)藍(lán)牙遠(yuǎn)程控制；

3，數(shù)據(jù)可追溯性：自動(dòng)存儲(chǔ)8000條記錄，支持電腦端數(shù)據(jù)導(dǎo)出；

4，自動(dòng)流量補(bǔ)償：誤差≤2%，避免因培養(yǎng)皿差異導(dǎo)致的數(shù)據(jù)偏差。

采樣準(zhǔn)備工作如下：

1、被測(cè)試手術(shù)室（潔凈室）溫、濕度須達(dá)到規(guī)定的要求；靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。

2、對(duì)單向流測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min；非單向流不少于30min后開始。

3、靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)人員不多于2人。采樣時(shí)測(cè)試人員應(yīng)在采樣口下風(fēng)側(cè)，并避免遮擋氣流。

4、測(cè)試人員應(yīng)按無菌操作規(guī)程進(jìn)行。采樣口、培養(yǎng)皿及操作工具需用75%乙醇擦拭消毒，消毒后空置≥5min。

5、測(cè)試人員必須穿戴符合潔凈級(jí)別的潔凈服。

6、浮游菌測(cè)試前，被測(cè)手術(shù)室（潔凈室）已經(jīng)過消毒，且消毒后靜置≥15min。

以上準(zhǔn)備好時(shí)，我們使用HKM-IIIB采樣器采樣步驟：

1、在有平臺(tái)的潔凈室內(nèi)編制培養(yǎng)皿（XX潔凈室，XX測(cè)點(diǎn)），操作前應(yīng)用浸濕75%乙醇的醫(yī)用脫脂棉花擦拭平臺(tái)。測(cè)試人員雙手用同樣方法嚴(yán)格消毒。在編制過程中再次仔細(xì)檢查培養(yǎng)基平皿的質(zhì)量，有變質(zhì)、破損或污染不能使用。

2、用浸濕75%乙醇的醫(yī)用脫脂棉花擦拭采樣器的采樣口、采樣管、采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤及罩子內(nèi)外表面，擦拭后靜置≥1min待乙醇揮發(fā)。

3、采樣器經(jīng)消毒后不放入培養(yǎng)皿，啟動(dòng)儀器空轉(zhuǎn)運(yùn)行不少于5min（流量100L/min），使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，并校準(zhǔn)流量傳感器。

4、根據(jù)手術(shù)室的潔凈度級(jí)別設(shè)定采樣量，采樣器的流量（100L/min）X 采樣時(shí)間（min）= 采樣量（L）。最小采樣量如下：

   ? 百級(jí)（ISO 5級(jí)）：≥1000L
   ? 千級(jí)（ISO 6級(jí)）：≥500L
   ? 萬級(jí)（ISO 7級(jí)）：≥250L

5、放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。采樣操作時(shí)，培養(yǎng)皿應(yīng)輕拿輕放，用“五指抓拿”培養(yǎng)皿外徑，盡量避免人為對(duì)樣本造成污染。

6、采樣點(diǎn)的布置及采樣點(diǎn)數(shù)量：測(cè)點(diǎn)位置離地面0.8m~1.5m；送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開送風(fēng)口面0.3m左右。最少采樣點(diǎn)數(shù)如下：

   ● 百級(jí)（ISO 5級(jí)）：≥5點(diǎn)（按房間對(duì)角線5點(diǎn)法布置）
   ● 千級(jí)（ISO 6級(jí)）：≥4點(diǎn)（按房間中心+四角法布置）
   ● 萬級(jí)（ISO 7級(jí)）：≥3點(diǎn)（按房間中心三角法布置）

 7、正式啟動(dòng)HKM-IIIB采樣器

   1、按觸控屏“采樣鍵”或通過手機(jī)藍(lán)牙小程序進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置界面，屏幕默認(rèn)顯示最近一次采樣參數(shù)（含采樣量、地點(diǎn)代碼、延遲時(shí)間）。
   2、按“選擇鍵”切換至目標(biāo)參數(shù)組（支持99組預(yù)存方案），通過上下鍵調(diào)整采樣量（10-6000L）、采樣延遲時(shí)間（0-60min）及地點(diǎn)代碼（如“OR-3-1”代表3號(hào)手術(shù)室1號(hào)點(diǎn)）。
   3、確認(rèn)參數(shù)后，按“啟動(dòng)鍵”開始采樣：
      ? 采樣延遲倒計(jì)時(shí)結(jié)束后，儀器自動(dòng)運(yùn)行（屏幕實(shí)時(shí)顯示剩余采樣量及進(jìn)度條）；
      ? 到達(dá)設(shè)定采樣量后，泵機(jī)自動(dòng)停止，數(shù)據(jù)（含時(shí)間、地點(diǎn)、溫濕度）存儲(chǔ)至本地（支持8000條）并同步至手機(jī)端；
      ? 若需中途停止，長(zhǎng)按“暫停鍵”2秒，數(shù)據(jù)仍自動(dòng)保存。

8、培養(yǎng)

   ★ 8.1，將采樣后的培養(yǎng)皿輕放于無菌平臺(tái)，倒置放置，用滅菌記號(hào)筆標(biāo)注采樣點(diǎn)信息（如“OR-3-1-20231001”）。
   ★ 8.2，使用高壓滅菌牛皮紙包裹培養(yǎng)皿（單層包裝），裝入專用消毒轉(zhuǎn)運(yùn)盒，于2-8℃避光保存。
   ★ 8.3，在生物安全柜內(nèi)，雙手經(jīng)75%乙醇消毒后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱（35℃±1℃）培養(yǎng)48±2小時(shí)。

9、菌落計(jì)算

9.1 計(jì)數(shù)方法：
   ● 肉眼初判：在自然光下統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)（直徑≥0.5mm）；
   ● 輔助復(fù)檢：使用環(huán)凱SmartCounter Pro菌落計(jì)數(shù)儀（5-10倍放大+AI識(shí)別），自動(dòng)標(biāo)記重疊菌落（如2個(gè)菌落重疊仍計(jì)為2個(gè)）；
   ● 爭(zhēng)議處理：兩名檢測(cè)員獨(dú)立計(jì)數(shù)，差異＞10%時(shí)重新判讀。

9.2 填寫《浮游菌檢測(cè)記錄表》（含以下字段）：
   ● 采樣時(shí)間、地點(diǎn)、潔凈度等級(jí)；
   ● 采樣量（L）、菌落數(shù)（CFU）、計(jì)算濃度（CFU/m3）；
   ● 操作人員簽名及審核人確認(rèn)。

10、結(jié)果計(jì)算

浮游菌濃度計(jì)算公式：濃度（CFU/m3）= 菌落數(shù)（CFU） / 采樣量（m3）
注：1m3=1000L，若采樣量為1000L，則直接取菌落數(shù)為濃度值（例：菌落數(shù)5 → 5 CFU/m3）。

注意：
1)、每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于所選的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于細(xì)菌濃度的界限。
2)、若某測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn), 則必須對(duì)此區(qū)域先行消毒, 然后重新采樣兩次。再次測(cè)試結(jié)果必須合格。