突破傳統(tǒng)：PMA-qPCR技術(shù)革新米粉中嗜酸乳桿菌活菌檢測(cè)
發(fā)布時(shí)間：2024-11-15 瀏覽次數(shù)：436
在食品微生物學(xué)領(lǐng)域，準(zhǔn)確評(píng)估食物中活菌數(shù)量是確保食品安全和質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的微生物檢測(cè)方法，如培養(yǎng)法，雖然被廣泛使用，但存在時(shí)間長(zhǎng)、易受非目標(biāo)微生物干擾等局限性。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，基于DNA的檢測(cè)方法因其快速和靈敏的特性而備受關(guān)注。然而，這些方法無(wú)法區(qū)分活菌和死菌，限制了其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用。為了克服這一挑戰(zhàn)，科研人員開發(fā)了基于碘化丙啶單偶氮化合物（PMA）的技術(shù)，用于活菌定量分析。本研究以米線產(chǎn)品中的嗜酸乳桿菌（Pediococcus acidilactici）為對(duì)象，評(píng)估并應(yīng)用了PMA技術(shù)，以提高活菌檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
研究摘要
本研究的主要目標(biāo)是開發(fā)和評(píng)估一種基于PMA的分子檢測(cè)方法，以準(zhǔn)確量化米線產(chǎn)品中活的嗜酸乳桿菌。該方法結(jié)合了PMA處理與實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）技術(shù)，通過(guò)選擇性地抑制死菌DNA的擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)了活菌的特異性檢測(cè)。研究結(jié)果表明，PMA-qPCR方法能夠有效區(qū)分活菌和死菌，且與傳統(tǒng)培養(yǎng)法相比，具有更高的靈敏度和特異性。該方法在米線產(chǎn)品中的應(yīng)用展示了其在復(fù)雜食品基質(zhì)中檢測(cè)活菌的潛力。
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研究具體所用的方法
研究首先在實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)PMA-qPCR方法進(jìn)行了優(yōu)化。通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)確定了最佳的PMA濃度和光照時(shí)間，以確保死菌DNA的完全抑制。隨后，在米線樣品中添加已知數(shù)量的活菌和死菌，驗(yàn)證了該方法的準(zhǔn)確性和可靠性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PMA處理有效地抑制了死菌DNA的擴(kuò)增，而對(duì)活菌的檢測(cè)沒(méi)有顯著影響。qPCR擴(kuò)增采用特異性引物，確保了對(duì)嗜酸乳桿菌的精準(zhǔn)檢測(cè)。
在實(shí)際應(yīng)用中，研究團(tuán)隊(duì)將優(yōu)化后的PMA-qPCR方法應(yīng)用于市售米線產(chǎn)品的檢測(cè)。樣品經(jīng)過(guò)PMA處理后，提取DNA并進(jìn)行qPCR分析。結(jié)果表明，該方法能夠靈敏地檢測(cè)出樣品中的活菌數(shù)量，并與傳統(tǒng)培養(yǎng)法的結(jié)果具有良好的一致性。
研究的結(jié)論
本研究成功開發(fā)了一種基于PMA的qPCR方法，用于米線產(chǎn)品中嗜酸乳桿菌活菌的定量分析。與傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法相比，該方法不僅縮短了檢測(cè)時(shí)間，還提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性。PMA-qPCR方法的應(yīng)用為食品微生物檢測(cè)提供了新的思路，特別是在需要快速、準(zhǔn)確評(píng)估食品中活菌數(shù)量的場(chǎng)合。
本研究為食品微生物檢測(cè)領(lǐng)域的科研人員提供了一種有效的工具，特別是在需要區(qū)分活菌和死菌的情況下。PMA-qPCR方法的成功應(yīng)用展示了其在復(fù)雜食品基質(zhì)中的潛力，為進(jìn)一步的研究提供了基礎(chǔ)。例如，未來(lái)的研究可以探索該方法在其他食品中的應(yīng)用，或結(jié)合其他分子生物學(xué)技術(shù)，以提高食品安全檢測(cè)的全面性和可靠性。此外，該研究還強(qiáng)調(diào)了優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件的重要性，為其他科研人員提供了寶貴的經(jīng)驗(yàn)。
對(duì)于非本領(lǐng)域的科研工作者，本研究展示了現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的創(chuàng)新應(yīng)用。通過(guò)理解PMA-qPCR方法的原理和應(yīng)用，讀者可以更好地認(rèn)識(shí)到食品微生物檢測(cè)的復(fù)雜性以及新技術(shù)在提升檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性方面的潛力。這一研究不僅推動(dòng)了食品安全領(lǐng)域的發(fā)展，也為跨學(xué)科的合作研究提供了啟示，鼓勵(lì)科研人員探索新的檢測(cè)方法和技術(shù)，以應(yīng)對(duì)不斷變化的食品安全挑戰(zhàn)。
參考文獻(xiàn)： https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2024.110889.
來(lái)源：微生物安全與健康網(wǎng)，作者~凌紀(jì)云。
