GB 4789.40-2024克羅諾桿菌檢驗標準變更匯總
發(fā)布時間：2024-08-30 瀏覽次數(shù)：693
GB4789.40-2024《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 克羅諾檢驗》于2024年2月8日發(fā)布，將于2024年8月8日正式實施。關(guān)于克羅諾桿菌檢驗2024版與2016版標準比對，小編為大家整理好了，以供大家參考。
一、新標準重點變化解析
1、修改了名稱
舊標準名稱為《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢驗》。
2、適用范圍增加了嬰幼兒輔助食品
標準適用范圍新增嬰幼兒輔助食品，即新標準適用于嬰幼兒配方食品、嬰幼兒輔助食品、乳及乳制品及其原料中克羅諾桿菌的檢驗。
有相關(guān)研究表明克羅諾桿菌從部分乳粉、谷類、淀粉制品，果蠅中都有檢出，結(jié)合克羅諾桿菌的致病性和臨床上的易感人群，發(fā)現(xiàn)克羅諾桿菌感染病例大多是嬰幼兒，所以嬰幼兒輔助食品與嬰幼兒配方食品、乳及乳制品等具有潛在風險，因此需要補充此類別。
3、增加了PCR鑒定方法作為選做內(nèi)容
增加PCR鑒定方法選做項目。可減少工作量，節(jié)省檢測時間，能夠滿足可疑菌落的高通量篩選的需求。因此在本次修訂也增加了“PCR鑒定方法作為選做內(nèi)容”的修改。
4、刪除了挑取黃色菌落和生化鑒定中的產(chǎn)黃色素和苦杏仁苷項目
研究表明部分克羅諾桿菌不產(chǎn)黃色素，TSA上產(chǎn)黃色素作為鑒定的關(guān)鍵步驟可能會造成漏檢，且產(chǎn)黃色項目在ISO 22964-2017已被取消，因此在新版標準中將該生化鑒定中“產(chǎn)黃色素項目”刪除。
5、修改了預熱、選擇性增菌溫度以及TSA平板的培養(yǎng)溫度和時間
BPW的預熱溫度由44℃調(diào)至41℃±1℃，mLST-Vm 增菌液培養(yǎng)溫度由“44℃±0.5℃變更為“41.5℃±1℃”。舊標準采用44℃的選擇性增菌溫度，該溫度與ISO 22964-2006相同，但是44℃在國際上存在爭議，該溫度被認為會對乳粉等食品中損傷的細菌有一定抑制作用，從而導致漏檢。ISO22964-2017標準也已將此溫度下調(diào)至41.5±1℃，本著盡量不損傷受傷細胞，提高檢出率的原則，因此新標準相應做了改變。
同時將TSA平板的培養(yǎng)溫度和時間由25℃±1℃培養(yǎng)48h±2h修改為36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h。
ISO 22964-2017中分離平板TSA是36℃±2℃培養(yǎng)21h±3h，F(xiàn)DA方法中的TSA也是36℃培養(yǎng)18-24小時，此處與國際方法一致，縮短了檢驗周期。
6、TSA純化5個單菌落平板后，鑒定菌的數(shù)量不定
舊標準中要求在阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基上挑選5個可疑菌落進行生化鑒定；而新標準中則在克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基上挑選5個可疑菌落后，可以選擇最具特征的菌落進行生化鑒定，如果挑中的第一個鑒定后為陽性，則后續(xù)4個都可以不做生化鑒定了，如果為陰性，則繼續(xù)挑選其他剩余菌落進行鑒定，直至全部為陰性或發(fā)現(xiàn)陽性菌落為止。因此，新標準中，菌落鑒定的數(shù)量可以是1~5個不等。
7、刪除了挑取黃色菌落和生化鑒定中的產(chǎn)黃色素的項目
有文獻報道：部分克羅諾桿菌在TSA上不產(chǎn)黃色素，僅依靠TSA上產(chǎn)黃色素來作為是否進行生化鑒定的依據(jù)會造成漏檢，目前在ISO22964-2017也被取消 。
8、刪除苦杏仁苷生化反應
目前國際上已不再使用該生化反應用于克羅諾桿菌鑒定，而刪除該反應也不影響該菌的判定，因此在本次修訂中將生化鑒定中的“苦杏仁苷項目”刪除。
9、修改了培養(yǎng)基pH調(diào)節(jié)方法
在舊標準中，各類培養(yǎng)基要求高壓滅菌之前調(diào)節(jié)至相應范圍，新標準則注重滅菌后的培養(yǎng)基pH值，改為“滅菌后的培養(yǎng)基25℃時”pH值應在相應范圍。
10、修改了氨基酸培養(yǎng)基的制備
新標準附錄A ，L-賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基和L-鳥氨酸脫羧酶培養(yǎng)基的制備中要求在121 ℃高壓滅菌前，新增操作“在上面滴加一層液體石蠟”。
二、克羅諾桿菌檢驗方法GB、BAM、ISO檢驗方法差異比對：
| GB、BAM、ISO檢驗方法差異比對 | ||||
| 方法來源 | GB4789.40-2016 | GB4789.40-2024 | BAM | ISO22964-2017(定性) |
| 取樣量 | 定性：100g | 定性：100g | 定性：100g | 10g/10mL+90mLBPW |
| 定量：100g、10g、1g | 定量：100g、10g、1g | 定量：100g、10g、1g | ||
| 增菌 | BPW（預熱44℃）預增菌 | BPW（預熱41℃）預增菌 | BPW預增菌 | BPW預增菌 |
| mLST-Vm選擇性增菌 | mLST-Vm選擇性增菌 | CSB選擇性增菌 | ||
| 培養(yǎng)條件 | BPW：36℃±1℃培養(yǎng)18h±2h | BPW：36℃±1℃培養(yǎng)18h±2h | 36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h | BPW：34℃-38℃培養(yǎng)18h±2h |
| mLST：44℃+0.5℃培養(yǎng)24h+2h | mLST：41.5℃±1℃培養(yǎng)24h+2h | CSB：41.5℃±1℃培養(yǎng)24h±2h | ||
| 分離培養(yǎng) | 阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基 | 克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基 | DFI和R&F瓊脂 | CCI瓊脂 |
| 計數(shù)方法 | MPN | MPN | MPN | 無 |
| 確證實驗 | TSA平板產(chǎn)黃色素、氧化酶陰性、L-賴氨酸脫羧酶陰性、L-鳥氨酸脫羧酶陽性、L-精氨酸雙水解酶陽性、檸檬酸水解陽性、D-山梨醇陰性、L-鼠李糖陽性、D-蔗糖陽性、D-蜜二糖陽性、苦杏仁苷陽性 | TSA平板產(chǎn)黃色素、氧化酶陰性、L-賴氨酸脫羧酶陰性、L-鳥氨酸脫羧酶陽性、L-精氨酸雙水解酶陽性、檸檬酸水解陽性、D-山梨醇陰性、L-鼠李糖陽性、D-蔗糖陽性、D-蜜二糖陽性、苦杏仁苷陽性 | VITEK2.0或RapidID32E | 氧化酶、4-硝基苯基a-D吡喃葡萄糖苷底物、L-賴氨酸脫羧酶、L-鳥氨酸脫羧酶、甲基紅(可選)、VP(可選) 發(fā)酵：D-阿拉伯糖醇、D-山梨醇、D-蔗糖、a-甲基-D-葡萄糖苷陽性(可選) |
| 分子方法 | 無 | PCR | PCR | 無 |
來源：“ 食品微生物檢測”公眾號；作者~ hhy。
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