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培養(yǎng)基的分裝與儲(chǔ)存

發(fā)布時(shí)間:2024-05-22    瀏覽次數(shù):2301

培養(yǎng)基的分裝

培養(yǎng)基的分裝應(yīng)根據(jù)使用的目的和要求分裝于不同的容器中,有的分裝后滅菌,有的則滅菌后再無菌操作分裝,但分裝量最大不宜超過容器容量的1/2,以免高壓滅菌時(shí)溢出或不能充分混勻。

1. 增菌培養(yǎng)基:分裝量約為容器容量的1/3~1/2,濃縮的培養(yǎng)基還可根據(jù)濃縮倍數(shù)減少分裝量。

2. 生化試驗(yàn)培養(yǎng)基:一般使用10 x100mm試管每管分裝2~3mL。

3. 半固體培養(yǎng)基:分裝量約為試管長(zhǎng)度的1/3~1/2,滅菌后直立凝固備用。

4. 瓊脂斜面:分裝量約為試管容量的1/5,滅菌后趁熱放成斜面使之凝固,斜面長(zhǎng)度約為試管長(zhǎng)度的 2/3。

5. 瓊脂平板:將滅菌或加熱熔化的培養(yǎng)基冷至50℃左右,以無菌手續(xù)傾人滅菌平皿內(nèi),內(nèi)徑9cm的平皿一般需傾注13~15mL(MH瓊脂應(yīng)25mL)。注意傾注培養(yǎng)基時(shí)平皿要放平,以保證培養(yǎng)基均勻平鋪于皿底,并勿將皿蓋全啟開,以免空氣中細(xì)菌及塵埃落入。新制備的平板培養(yǎng)基凝固后表面會(huì)形成一定量的凝集水,影響細(xì)菌的分離效果,通常可將平皿倒扣于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約30min,待培養(yǎng)基表面無水滴后使用。

分裝培養(yǎng)基時(shí)還應(yīng)注意以下兩點(diǎn):
     (1) 各種分裝容器應(yīng)清潔干凈,最好經(jīng)干烤滅菌后使用,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。
     (2) 每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝2支,每支10mL,隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌,以備測(cè)定該批培養(yǎng)基的最后pH之用。

培養(yǎng)基的儲(chǔ)存

制成的培養(yǎng)基,不宜保存過久,最好現(xiàn)用現(xiàn)配。確需儲(chǔ)存一定時(shí)間的培養(yǎng)基,每批應(yīng)注明日期,嚴(yán)格密封置于2℃~8℃冰箱保存。試管培養(yǎng)基一般可保存3~6個(gè)月,平板培養(yǎng)基密封于塑料袋內(nèi)可保存2~4周。我們將巧克力色血瓊脂,用一次性塑料平皿,密封儲(chǔ)存于2℃~8℃冰箱,1月內(nèi)無明顯變化,接種腦膜炎奈瑟菌仍生長(zhǎng)良好。培養(yǎng)基的避光保存尤為重要,據(jù)報(bào)導(dǎo),培養(yǎng)基日光直射15min,培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌特性的改變。培養(yǎng)基不宜多次反復(fù)加熱。有的培養(yǎng)基不宜在冰箱保存,如用于無菌試驗(yàn)的流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基,因含有少量瓊脂,在低溫下易凝固,影響需氧菌生長(zhǎng),若反復(fù)加熱,可能會(huì)產(chǎn)生絮狀物,影響結(jié)果的觀察。此培養(yǎng)基應(yīng)放30℃以下的室溫避光保存,盡早使用。

干燥培養(yǎng)基在冷、暗、干燥處密封保存,保質(zhì)期可達(dá)2~3年。其保質(zhì)期長(zhǎng)短與培養(yǎng)基成分及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存環(huán)境、密封程度密切相關(guān)。

不同的培養(yǎng)基保存時(shí)間存在差異,無論何種培養(yǎng)基,關(guān)鍵是保存條件和培養(yǎng)基質(zhì)量變化,只要發(fā)生濃縮、干裂、顏色變化、有菌生長(zhǎng)或干粉培養(yǎng)基潮解,就應(yīng)廢棄不用。反之,經(jīng)測(cè)試質(zhì)量無變化時(shí),仍可使用。

來源:《微生物培養(yǎng)基實(shí)用手冊(cè)》電子書
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