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水中總大腸菌群檢驗(yàn)方法中培養(yǎng)基成分分析及作用

發(fā)布時(shí)間:2024-04-24    瀏覽次數(shù):736

培養(yǎng)基是微生物檢驗(yàn)中常用的一種實(shí)驗(yàn)室試劑,主要用于提供微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)、能量、生長(zhǎng)因子等物質(zhì)和適宜的生長(zhǎng)環(huán)境。常見(jiàn)的培養(yǎng)基種類很多,根據(jù)不同的需求可以選擇不同類型的培養(yǎng)基。

具體來(lái)說(shuō),培養(yǎng)基在微生物檢驗(yàn)中的作用包括:
   1. 提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):培養(yǎng)基中含有細(xì)菌或真菌所需的碳源、氮源、磷源、微量元素、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),能夠滿足微生物的生長(zhǎng)和繁殖需要。
   2. 提供生長(zhǎng)因子:某些微生物需要特殊的生長(zhǎng)因子才能生長(zhǎng),如某些細(xì)菌需要血紅蛋白、NAD等,培養(yǎng)基可以添加這些生長(zhǎng)因子以促進(jìn)微生物的生長(zhǎng)。
   3. 維持適宜的生理狀態(tài):培養(yǎng)基可以調(diào)節(jié)pH值、溫度、氧氣濃度、鹽度等因素,使微生物處于適宜的生理狀態(tài),促進(jìn)其生長(zhǎng)和繁殖。
   4. 檢測(cè)微生物數(shù)量:通過(guò)培養(yǎng)基上的特定反應(yīng),如酶底物法、品紅亞硫酸鈉法等,可以檢測(cè)微生物的數(shù)量和質(zhì)量。

總之,培養(yǎng)基是微生物檢驗(yàn)中必不可少的一種實(shí)驗(yàn)室試劑,能夠提供微生物所需的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境,促進(jìn)其生長(zhǎng)和繁殖,從而為微生物檢驗(yàn)提供了必要的條件。在新版的 GBT 5750.12-2023《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 第12部分:微生物指標(biāo)》中提供了三種總大腸菌群的檢驗(yàn)方法,其培養(yǎng)基的成分作用如下:

一、多管發(fā)酵法

1.1 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液成分及其作用如下:
   a) 蛋白胨:提供細(xì)菌所需的氮源和碳源,促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)。
   b) 牛肉膏:提供多種氨基酸和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)。
   c) 乳糖:為大腸桿菌等腸道細(xì)菌提供碳源,促進(jìn)它們的代謝。
   d) 氯化鈉:調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓,保證培養(yǎng)基中的離子平衡。
   e) 溴甲酚紫乙醇溶液(16 g/L):是一種指示劑,將在發(fā)酵過(guò)程中變色,用于判斷菌落形成和數(shù)量。
   f) 純水:作為培養(yǎng)基的溶劑,保證培養(yǎng)基的均勻性和穩(wěn)定性。

這些成分共同作用,能夠提供合適的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件,促進(jìn)水中總大腸菌群的生長(zhǎng)和繁殖,并且通過(guò)溴甲酚紫乙醇溶液的變色反應(yīng),可以判斷菌落形成和數(shù)量。

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液

1.2 伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基各成分的作用如下:
   a) 蛋白胨:為細(xì)菌提供氮源和碳源,促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)。
   b) 乳糖:為大腸桿菌等腸道細(xì)菌提供碳源,促進(jìn)它們的代謝。
   c) 磷酸氫二鉀:調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值,使其維持在適宜的范圍內(nèi)。
   d) 瓊脂:作為凝膠劑,使得培養(yǎng)基能夠固化。
   e) 純水:作為培養(yǎng)基的溶劑,保證培養(yǎng)基的均勻性和穩(wěn)定性。
   f) 伊紅水溶液(20.0 g/L):是一種指示劑,將在發(fā)酵過(guò)程中變色,用于判斷菌落形成和數(shù)量。
   g) 美藍(lán)水溶液(5.0 g/L):也是一種指示劑,將在發(fā)酵過(guò)程中變色,用于判斷菌落形成和數(shù)量。

這些成分共同作用,能夠提供合適的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件,促進(jìn)水中總大腸菌群的生長(zhǎng)和繁殖,并且通過(guò)伊紅美藍(lán)指示劑的變色反應(yīng),可以判斷菌落形成和數(shù)量。

伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)培養(yǎng)基

二、濾膜法

2.1 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基各成分的作用如下:
   a) 蛋白胨:為細(xì)菌提供氮源和碳源,促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)。
   b) 酵母浸膏:提供多種維生素和微量元素,促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)。
   c) 牛肉膏:為細(xì)菌提供營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子,促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)。
   d) 乳糖:為細(xì)菌提供碳源和能量,促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)。
   e) 瓊脂:作為培養(yǎng)基的凝膠劑,使培養(yǎng)基凝固。
   f) 磷酸氫二鉀:調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值,使其維持在適宜的范圍內(nèi)。
   g) 無(wú)水亞硫酸鈉:具有抗氧化作用,保護(hù)培養(yǎng)基中的細(xì)菌不被氧化破壞。
   h) 堿性品紅乙醇 [φ (C2H5OH)=95 %]溶液(50.0 g/L):是一種指示劑,能夠區(qū)分產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的細(xì)菌,使其呈現(xiàn)紅色或粉紅色。
   i) 純水:作為培養(yǎng)基的溶劑,保證培養(yǎng)基的均勻性和穩(wěn)定性。

這些成分共同作用,能夠提供合適的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件,促進(jìn)水中總大腸菌群的生長(zhǎng)和繁殖。通過(guò)品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基的特殊配方,能夠區(qū)分產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的細(xì)菌,并且使其呈現(xiàn)紅色或粉紅色,從而進(jìn)行總大腸菌群的檢測(cè)。

品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基

三、酶底物法

3.1、MMO-MUG培養(yǎng)基各成分的作用如下:
   a) 硫酸銨:提供氮源,促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)。
   b) 無(wú)水硫酸錳:作為酶的輔因子,促進(jìn)酶在催化反應(yīng)過(guò)程中的活性。
   c) 無(wú)水硫酸鋅:作為酶的輔因子,促進(jìn)酶在催化反應(yīng)過(guò)程中的活性。
   d) 無(wú)水硫酸鎂:提供鎂離子,促進(jìn)酶的活性。
   e) 氯化鈉:調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓,保證細(xì)胞內(nèi)外的離子平衡。
   f) 氯化鈣:提供鈣離子,促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)。
   g) 亞硫酸鈉:具有抗氧化作用,保護(hù)培養(yǎng)基中的酶不被氧化破壞。
   h) 兩性霉素 B(Amphotericin B):是一種抗真菌藥物,用于防止培養(yǎng)基中的真菌污染。
   i) 鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG):是一種酶底物,在酶的作用下會(huì)被分解,產(chǎn)生黃色產(chǎn)物,用于檢測(cè)細(xì)菌的數(shù)量。
   j) 4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷(MUG):也是一種酶底物,在酶的作用下會(huì)被分解,產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,用于檢測(cè)細(xì)菌的數(shù)量。
   k) 茄屬植物萃取物(Solanium 萃取物):為細(xì)菌提供營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子,促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)。
   l) N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸鈉鹽(HEPES 鈉鹽):調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值,使其維持在適宜的范圍內(nèi)。
   m) N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸(HEPES):同樣用于調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值。
   n) 純水:作為培養(yǎng)基的溶劑,保證培養(yǎng)基的均勻性和穩(wěn)定性。

這些成分共同作用,能夠提供合適的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件,促進(jìn)水中總大腸菌群的生長(zhǎng)和繁殖,并且通過(guò)ONPG和MUG酶底物的分解反應(yīng),能夠產(chǎn)生黃色或藍(lán)色產(chǎn)物,用于檢測(cè)細(xì)菌的數(shù)量。

MMO-MUG培養(yǎng)基

原標(biāo)題:“方法解讀1:水中總大腸菌群檢驗(yàn)方法中的培養(yǎng)基”

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