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培養(yǎng)基的分類介紹(摘抄微生物培養(yǎng)基使用手冊(cè))

發(fā)布時(shí)間:2022-05-30    瀏覽次數(shù):4245

由于微生物的種類繁多,對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的需求各不相同,所需要的培養(yǎng)基成分復(fù)雜,品種繁多,據(jù)不完全統(tǒng)計(jì),目前常用的培養(yǎng)基約有1700余種,而且,隨著生物科學(xué)的發(fā)展,培養(yǎng)基的種類也在不斷增加。培養(yǎng)基的分類方法目前尚未統(tǒng)一,一般常按培養(yǎng)基的成分、物理狀態(tài)、用途等加以區(qū)分。

一、按成分分類
      1、天然培養(yǎng)基( native medium)
      2、合成培養(yǎng)基(synthetic medium)
二、按形態(tài)分類
      1、液體培養(yǎng)基(liquid nutrient medium)
      2、流體培養(yǎng)基(semi-liquid medium)
      3、半固體培養(yǎng)基(half-solid medium)
      4、固體培養(yǎng)基(solid medium)
三、按用途分類
      1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基(basic media)
      2、營養(yǎng)培養(yǎng)基(nutrient media)
      3、增菌培養(yǎng)基(enrichment media)
      4、選擇性培養(yǎng)基(selective media)
      5、鑒別培養(yǎng)基(differential media)
      6、厭氧菌培養(yǎng)基(anaerobic media)
      7、細(xì)胞培養(yǎng)液(liquid of culture cellulae)

一、按成分分類

根據(jù)培養(yǎng)基的組成成分,可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基兩大類。

1、天然培養(yǎng)基(native medium) 含有不完全明了化學(xué)成分的天然物質(zhì)。如蛋白胨、牛肉膏(粉)、肉浸液、玉米漿、血液、馬鈴薯等。用此類材料配成的培養(yǎng)基很難做到不同批號(hào)之間質(zhì)量的穩(wěn)定一致,因此在選用原料時(shí)務(wù)必注明其商品名稱、生產(chǎn)廠家及批號(hào),對(duì)不同來源的原料應(yīng)先做小樣試驗(yàn)。此種培養(yǎng)基成本較低,細(xì)菌繁殖較好,一般細(xì)菌培養(yǎng)以選用天然培養(yǎng)基為主。

2、合成培養(yǎng)基(synthetic medium) 由已知化學(xué)成分的營養(yǎng)物質(zhì)組成的培養(yǎng)基。根據(jù)微生物對(duì)營養(yǎng)要求的不同,可完全由無機(jī)鹽或化合物組成,如:氨基酸、糖、嘌呤、嘧啶、維生素等,其組成成分已知,只要嚴(yán)格操作,各批次間質(zhì)量可做到穩(wěn)定一致。此培養(yǎng)基可用來檢測(cè)某種營養(yǎng)物或藥物對(duì)微生物代謝的影響。組織細(xì)胞培養(yǎng)液均屬合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的成本較高,其價(jià)格相當(dāng)于同類天然培養(yǎng)基的幾倍以至于幾十倍。只含幾種無機(jī)鹽的合成培養(yǎng)基,僅適用于自養(yǎng)菌的培養(yǎng),如培養(yǎng)亞硝化細(xì)菌、氧化硫桿菌等的培養(yǎng)基。有些培養(yǎng)基大部分成分為已知化學(xué)結(jié)構(gòu)的營養(yǎng)物質(zhì),其中的個(gè)別或少數(shù)成分為未明化學(xué)成分的必須營養(yǎng)物,成為半合成培養(yǎng)基,如百日咳菌苗生產(chǎn)用的水解酪素培養(yǎng)基。

二、按形態(tài)分類

培養(yǎng)基按其不同的物理狀態(tài),可分為液體、流體、半固體和固體4類,培養(yǎng)基的物理狀態(tài)取決于培養(yǎng)基中是否加人凝固劑或凝固劑的加入量。

1、液體培養(yǎng)基(liquid nutrient medium) 不加任何凝固劑,常溫下以完全液態(tài)存在的培養(yǎng)基,如肉湯培養(yǎng)基或一般液體增菌培養(yǎng)基。

2、流體培養(yǎng)基(semi-liquid medium) 在液體培養(yǎng)基中加入0.05%~0.1%的瓊脂粉,使其具一定黏度,即成流體培養(yǎng)基。加入瓊脂粉增加了培養(yǎng)基的黏度,降低空氣中的氧氣進(jìn)人培養(yǎng)基的速度,能使培養(yǎng)基保持較長時(shí)間的厭氧條件,有利于一般厭氧菌的生長繁殖,如硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基等。一般用于霉菌和厭氧菌檢查的液體培養(yǎng)基中可加人少量瓊脂使其成為流體培養(yǎng)。

3、半固體培養(yǎng)基(half-solid medium) 在液體培養(yǎng)基中加人0.2%~0.5%的瓊脂粉,加熱溶解后冷卻即成,以倒置不流動(dòng)的最軟狀態(tài)為宜,一般供細(xì)菌動(dòng)力試驗(yàn)、菌種傳代、保存和儲(chǔ)運(yùn)標(biāo)本之用。

4、固體培養(yǎng)基(solid medium) 培養(yǎng)基中含有足量的凝固劑(瓊脂粉>0.5%),在常溫下能保持固體狀態(tài)。此類培養(yǎng)基大都用于微生物的分離、純化、藥敏試驗(yàn)及菌苗制造。如營養(yǎng)瓊脂、營養(yǎng)斜面、SS瓊脂、TCBS瓊脂等。此外,還有一些特殊用途的培養(yǎng)基,如用血清或雞蛋做凝固劑配成的呂氏血清斜面培養(yǎng)基、雞蛋斜面培養(yǎng)基等。

三、按用途分類

根據(jù)用途不同,培養(yǎng)基可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、厭氧菌培養(yǎng)基等。

1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基(basic media) 大多數(shù)微生物共同需要的營養(yǎng)基礎(chǔ)。某--微生物如有特殊需要,可在此基礎(chǔ)上添加某種成分即可,如蛋白胨水、肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂等。1%蛋白胨水培養(yǎng)基便是一個(gè)最簡(jiǎn)單的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,該基礎(chǔ)培養(yǎng)基本身可供一般細(xì)菌增菌培養(yǎng)和靛基質(zhì)試驗(yàn)用,若再加入指示劑和糖類,則配成糖發(fā)酵培養(yǎng)基,供糖發(fā)酵試驗(yàn)用,成為鑒別培養(yǎng)基;若在1%蛋白胨水中增加氯化鈉用量并將pH提高到8.6左右,則變成堿性蛋白胨水,用于霍亂弧菌的增菌培養(yǎng),成為專用增菌培養(yǎng)基。

2、營養(yǎng)培養(yǎng)基(nutrient media) 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加一些特殊的營養(yǎng)物質(zhì),如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生長因子等,可供營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌在其中生長。例如鏈球菌、肺炎鏈球菌等需在含血液或血清的培養(yǎng)基中生長;結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)基中須添加雞蛋、馬鈴薯、甘油等。最常用的營養(yǎng)培養(yǎng)基是血瓊脂平板。

3、增菌培養(yǎng)基(enrichment media)  一般為液體培養(yǎng)基,用于細(xì)菌的增菌培養(yǎng),可泛用,也可專用,在專用增菌培養(yǎng)基中常含有目的菌生長所需要的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或生長因子。

4、選擇性培養(yǎng)基(selective media) 選擇性培養(yǎng)基含有營養(yǎng)物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑),標(biāo)本接種于此類培養(yǎng)基后,由于抑菌劑的選擇性抑制作用,使非目的菌受到不同程度的抑制,更有利于目的菌的增殖或分離。利用選擇性培養(yǎng)基經(jīng)過一定時(shí)間的增菌培養(yǎng),再接種于選擇性鑒別培養(yǎng)基,可以提高目的菌的陽性檢出率。抑菌劑的種類很多,常用的有孔雀綠、燦爛綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉、各種抗生素等。抑菌劑的加入量要適宜、準(zhǔn)確,有的劇毒,有的不耐高熱,配制時(shí)須特別注意。

5、鑒別培養(yǎng)基(differential media) 在培養(yǎng)基中加入某一反應(yīng)底物和指示劑,以區(qū)別某些微生物的特性從而鑒別之。又分一般鑒別培養(yǎng)基和選擇性鑒別培養(yǎng)基。只用于區(qū)別不同微生物種類的培養(yǎng)基稱為-般鑒別培養(yǎng)基,此類培養(yǎng)基中一般不加抑菌劑而只含指示劑,如克氏雙糖鐵培養(yǎng)基,含有葡萄糖及乳糖,以酚紅作為指示劑,觀察培養(yǎng)基底層與斜面的顏色變化判定細(xì)菌對(duì)葡萄糖和乳糖的發(fā)酵能力,加人檸檬酸鐵銨,培養(yǎng)后觀察是否產(chǎn)生黑色沉著以判定細(xì)菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而產(chǎn)生硫化氫;又如伊紅-美藍(lán)瓊脂,含有乳糖(反應(yīng)底物)、伊紅-美藍(lán)(指示劑)用以鑒別大腸埃希菌、腸道病原菌和其他雜菌。一般鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)是在配方中都含有指示劑,并可用于區(qū)別不同種類的微生物,有些鑒別培養(yǎng)基也可同時(shí)作為細(xì)菌的特殊需要用來分離培養(yǎng)某些細(xì)菌,如胰酪胨大豆瓊脂和巧克力色血瓊脂。

在培養(yǎng)基中加人某種抑制劑和指示劑,抑制某些細(xì)菌生長,促進(jìn)目的菌的繁殖,并使所生長的細(xì)菌菌落具有一定特征,以助鑒別挑選,這類培養(yǎng)基稱為選擇性鑒別培養(yǎng)基。如SS瓊脂,在該培養(yǎng)基配方中含有乳糖(反應(yīng)底物)、中性紅和檸檬酸鐵銨(指示劑)、燦爛綠及膽鹽等(抑菌劑)。燦爛綠和膽鹽等抑菌劑能抑制革蘭氏陽性菌及部分大腸埃希菌的生長,而對(duì)沙門菌及志賀菌基本無影響,而且大腸埃希菌能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸,使菌落變紅色,沙門菌和志賀菌不發(fā)酵乳糖,其菌落為無色。如細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫,則與檸檬酸鐵銨反應(yīng)生成硫化亞鐵沉淀,菌落中心呈黑色或褐色。以此達(dá)到鑒別的目的。

近年來,國內(nèi)外利用某些細(xì)菌特有的酶,選擇相應(yīng)的作用底物,研制出某些細(xì)菌專用的顯色培養(yǎng)基,用于細(xì)菌的分離鑒別,收到了良好的效果,這種顯色培養(yǎng)基實(shí)際上也是鑒別培養(yǎng)基。其基本原理是將色原(或熒光原)與細(xì)菌作用底物的結(jié)合物加于培養(yǎng)基中,當(dāng)細(xì)菌含有相應(yīng)酶時(shí),使該結(jié)合物分解而顯色(或顯示熒光)。如色原糖苷結(jié)合物在糖苷酶作用下分解,使糖苷與色原分離,并顯示顏色;熒光氨基酸結(jié)合物(不顯熒光)在氨基肽酶作用下,使氨基酸與熒光物質(zhì)分離而顯示熒光。常用顯色的色原有α-萘酚、β-萘酚、鄰位硝基酚、對(duì)位硝基酚、對(duì)硝基苯胺、酚酞、2-氨基4-硝基苯等;常用的熒光物有4-甲基傘形酮(又稱7 -羥基4-甲基香豆素)等。目前,顯色培養(yǎng)基已用于多種細(xì)菌或真菌的分離鑒別培養(yǎng),如沙門菌、大腸埃希菌、李斯特菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌、白色念珠菌等顯色培養(yǎng)基。

還有一些鑒別性培養(yǎng)基,是利用細(xì)菌特有的各種酶系統(tǒng),能分解利用各種特定的糖、醇、氨基酸或其他基質(zhì)而產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)堿或產(chǎn)生其他可見物質(zhì),依此進(jìn)行細(xì)菌的鑒別,例如常用的生化培養(yǎng)基。

用于細(xì)菌生化特性試驗(yàn)的培養(yǎng)基特點(diǎn)是在無糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加人某種特定的基質(zhì),并加人指示劑,細(xì)菌在此類培養(yǎng)基中的一系列生化反應(yīng)結(jié)果,均通過指示劑最終顯示出來。此類培養(yǎng)基為生化反應(yīng)鑒別培養(yǎng)基。根據(jù)用量又可分為常量生化培養(yǎng)基和微量生化培養(yǎng)基。值得注意的是生化試驗(yàn)培養(yǎng)基的某些成分受高溫、pH等諸多因素的影響,在配制和使用時(shí),應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況嚴(yán)格掌握,防止有效成分被破壞,以保障其使用效果。

6、厭氧菌培養(yǎng)基(anaerobic media) 供厭氧菌的分離、培養(yǎng)和鑒別用的培養(yǎng)基,稱為厭氧菌培養(yǎng)基。由于厭氧菌自身缺乏有氧代謝所必需的各種酶,如細(xì)胞色素和細(xì)胞色素氧化酶、過氧化氫酶和過氧化物酶、超氧化歧化酶,所以造成自身代謝的缺陷,無法進(jìn)行有氧代謝,而無氧酵解所產(chǎn)生的能量又不足,因此厭氧菌在正常的大氣環(huán)境下不能生長和生存。為使厭氧菌能正常生長,必須制備營養(yǎng)成分豐富,氧化還原電勢(shì)較低,具有特殊生長因子的專用培養(yǎng)基。

通常用心、腦或其他臟器浸液配制厭氧菌培養(yǎng)基,并常需加入硫乙醇酸鈉、半胱氨酸、肉渣、還原鐵、活性炭等還原劑或除氧材料。在液體培養(yǎng)基中還可加入刃天青或亞甲基藍(lán)作為氧化還原指示劑,以觀察培養(yǎng)基的含氧程度。心、腦浸液、肝塊、肉渣中含有不飽和脂肪酸,能吸收培養(yǎng)基中的氧。硫乙醇酸鈉、半胱氨酸是較強(qiáng)的還原劑,能消耗溶解在培養(yǎng)基中的氧。干燥的活性炭和脫脂棉同樣能吸收培養(yǎng)基中的氧。所以培養(yǎng)基中加入還原劑和吸收材料,目的都是為造成培養(yǎng)基的缺氧環(huán)境,使培養(yǎng)基保持較低的氧化還原電勢(shì)。此外,還可在培養(yǎng)基表面加一層液體石蠟,以隔絕培養(yǎng)基與大氣的接觸。

7、細(xì)胞培養(yǎng)液(liquid of culture cellulae) 是指用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存、運(yùn)輸活組織、器官及細(xì)胞的液體,實(shí)質(zhì)為人工模擬體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境,使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長和繁殖的能力。由于其成分?jǐn)?shù)量明確并可通過調(diào)節(jié)某一種成分來觀察被研究對(duì)象的各種生物學(xué)改變,被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)科的研究。細(xì)胞培養(yǎng)液的組成成分主要有水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子、生長因子等,這些成分必須通過嚴(yán)格挑選,嚴(yán)格測(cè)試后方可使用,所用的水必須達(dá)到2級(jí)試驗(yàn)用水(CB/T 6682-1992),所用的器皿必須清潔無污并進(jìn)行高壓滅菌或干烤去熱源處理。

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