一種在菌落總數(shù)測定中防止芽胞桿菌 菌落彌漫生長的方法
發(fā)布時間：2022-02-24 瀏覽次數(shù)：2347
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隨著食品工業(yè)發(fā)展，食品種類越來越多，生產原料品種越來越廣，加工工藝也越來越復雜，但微生物的污染仍然無法避免，特別是糕點、面點等含高淀粉類食品受芽胞桿菌污染的機率大，加工過程中難以徹底滅菌，菌落計數(shù)時瓊脂平板上就會出現(xiàn)菌落彌漫生長的現(xiàn)象，導致菌落難以計數(shù)，對菌落總數(shù)檢驗項目的準確性造成嚴重的干擾。
需氧細菌的新陳代謝作用能將 2，3，5 － 三苯基氯化四氮唑（TTC）還原為紅色的三苯甲臢（TPF），使得菌落呈紅色，故可以將 TTC 作為細菌生長的指示劑，同時 TTC 對細菌的生長有一定的抑制作用。因 此，可以利用 TTC 這一特性，尋求抑制菌落彌漫生長的有效方法，便于菌落計數(shù)。
鄭連寶，陳文祥，嵇林風等取適宜稀釋度的枯草芽胞桿菌（ Bacillus subtilis）、蠟樣芽胞桿菌（Bacillus cereus）、大腸埃希菌（Escherichia coli） 、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），在平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基【平板計數(shù)瓊脂（PCA）培養(yǎng)基】中分別添加 0.01% 、0.05% 、0.08% 、0.1% 、0.2% 、 0.3% 、0.4% 、0.5% 、0.8% 、1.0% TTC 水溶液，同時以不添加 TTC 的計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基作為對照，觀察細菌的生長狀況。結果 TTC 濃度為 0.2% ～ 0.3% 時，能有效防止枯草芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌在計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落彌漫生長，同時對大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌的生長無顯著影響。
不同濃度 TTC 對細菌生長的影響
當枯草芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌菌液稀釋濃度分別為 10 － 5 和 10 －6時，菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍( 30 cfu/ml ～300 cfu/ml) 。
從表 1 可知，不同濃度 TTC 對細菌生長呈現(xiàn)不同的抑制效果。低濃度 TTC 對菌落總數(shù)計數(shù)無顯著影響。
不同濃度 TTC 對枯草芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌菌落形態(tài)的影響
由圖1和圖2所示，不同濃度 TTC 對枯草芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌菌落形態(tài)也呈現(xiàn)出 3 種狀態(tài)。
TTC 濃度為 0.2% ～ 0.3% 時，菌落顏色愈紅，菌落形態(tài)與直徑大小接近對照組，但計數(shù)平板上菌落彌漫生長現(xiàn)象基本消失。
綜上所述，TTC 濃度為 0.2% ～ 0.3% 時，能有效防止枯草芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌在計數(shù)瓊脂上出現(xiàn)菌落彌漫生長，同時對細菌的生長無顯著影響，而覆蓋法防止菌落彌漫生長的效果欠佳。因此，食品微生物檢驗中測定菌落總數(shù)時，遇到易受芽胞桿菌污染的食品，可在瓊脂中加入 0.2% ～ 0.3% 的 TTC 防止菌落出現(xiàn)彌漫現(xiàn)象而導致無法計數(shù)的情況發(fā)生。
內容來源：鄭連寶,陳文祥,嵇林風,章小洪,丁琦,施華標.一種在菌落總數(shù)測定中防止芽胞桿菌菌落彌漫生長的方法[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2019,29(22):2715-2717.
