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食品微生物檢驗副溶血性弧菌檢驗常用培養(yǎng)基原理解析

發(fā)布時間:2020-11-26    瀏覽次數(shù):11044

3%氯化鈉堿性蛋白胨水

?蛋白胨提供碳源、氮源、維生素、生長因子;高含量氯化鈉和高pH值可以抑制非弧菌類細(xì)菌生長,不影響副溶血性弧菌生長。

硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖(TCBS)瓊脂

?配方中多價蛋白胨、酵母膏粉提供碳氮源、維生素和生長因子;氯化鈉可刺激弧菌的生長;蔗糖是可發(fā)酵的糖類;膽酸鈉、牛膽汁粉、硫代硫酸鈉和檸檬酸鈉及較高的pH可抑制革蘭氏陽性菌和大腸菌群;硫代硫酸鈉與檸檬酸鐵反應(yīng)作為檢測硫化氫產(chǎn)生的指示劑;溴麝香草酚藍(lán)和麝香草酚藍(lán)是pH指示劑;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑 。

?副溶血性弧菌不發(fā)酵蔗糖,不會使培養(yǎng)基pH降低,因而在該培養(yǎng)基上為綠色菌落,創(chuàng)傷和擬態(tài)弧菌都不發(fā)酵蔗糖,需進(jìn)一步確證鑒定,霍亂弧菌發(fā)酵蔗糖為黃色。

副溶血性弧菌為綠色菌落

弧菌顯色培養(yǎng)基

?配方中蛋白胨和酵母膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源;蔗糖為可發(fā)酵的糖類;抑菌劑抑制大部分非弧菌細(xì)菌,氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;混合色素與副溶血性弧菌、霍亂弧菌和創(chuàng)傷弧菌所對應(yīng)的酶發(fā)生特異性反應(yīng),水解底物,釋放出顯色基團,在淡黃色平板上產(chǎn)生品紅色菌落(副溶血性弧菌)和綠-藍(lán)綠色的菌落(霍亂弧菌和創(chuàng)傷弧菌)。

副溶血性弧菌為品(紫)紅色菌落

3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂

?胰蛋白胨、大豆蛋白胨提供氮源、維生素、生長因子;高含量氯化鈉可以抑制非弧菌類細(xì)菌生長,不影響副溶血性弧菌生長;瓊脂為凝固劑。

氧化酶試驗

原理:氧化酶使細(xì)胞色素C氧化,氧化型細(xì)胞色素C再氧化對苯二胺試劑形成紫色復(fù)合物,產(chǎn)生顏色反應(yīng)。

操作:滴加1滴氧化酶試劑到一小塊潔凈濾紙上,用玻棒或接種環(huán)(鉑或塑料)挑取適量新鮮菌苔涂在試劑潤濕的紙片上;30秒內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)紫色為陽性,延遲反應(yīng)或無顏色變化為陰性。

3%氯化鈉三糖鐵瓊脂

?蛋白胨、牛肉膏粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì);乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類,其產(chǎn)酸時通過酚紅指示劑測出,酸性呈黃色,堿性呈紅色;硫代硫酸鈉可被某些細(xì)菌還原為硫化氫,與硫酸亞鐵中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;較高含量的氯化鈉維持弧菌均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

副溶血性弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂上的特征

嗜鹽性試驗

?挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落,分別接種0%、6%、8%和10%不同氯化鈉濃度的胰胨水,36℃±1℃培養(yǎng)24 h,觀察液體混濁情況。副溶血性弧菌在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長或微弱生長,在6%氯化鈉和8%氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。

賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基

?具有氨基酸脫羧酶的細(xì)菌,能分解氨基酸使其脫羧生成胺(賴氨酸→尸胺)和二氧化碳,使培養(yǎng)基變堿,使指示劑顯示出來。

?結(jié)果判讀:陽性為試驗管為綠色-藍(lán)綠色,對照管變黃色; 陰性為試驗管和對照管均變黃色,或均不變色。

3%氯化鈉甘露醇發(fā)酵試驗

?絕大多數(shù)細(xì)菌利用糖(醇)類作為碳源和能源,代謝產(chǎn)酸(如乳酸、醋酸、丙酸等),使酸堿指示劑變色來斷定。

?(指示劑為溴甲酚紫)結(jié)果判讀:陽性為變黃色; 陰性為紫色。

3%氯化鈉甘露醇發(fā)酵試驗

3%氯化鈉葡萄糖磷酸鹽胨水(VP試驗)

?某些細(xì)菌能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,并進(jìn)一步將丙酮酸脫羧成為乙酰甲基甲醇,后面在堿性環(huán)境下被空氣中的氧氧化成為二乙酰,進(jìn)而與培養(yǎng)基中的精氨酸等所含的胍基結(jié)合,形成紅色的化合物,即VP試驗陽性。

我妻氏血瓊脂(神奈川試驗)

?酵母膏粉、蛋白胨提供氮源、維生素、生長因子;高含量氯化鈉可以抑制非弧菌的細(xì)菌生長,不影響副溶血性弧菌生長;磷酸氫二鉀為pH緩沖劑;甘露醇為可發(fā)酵的醇;結(jié)晶紫抑制革蘭氏陽性菌,特別抑制革蘭氏陽性桿菌和糞鏈球菌;兔血紅細(xì)胞用于檢測副溶血性弧菌是否具有特定溶血素;瓊脂為凝固劑。

?陽性結(jié)果為菌落周圍呈半透明環(huán)的β溶血。

副溶血性弧菌神奈川試驗陽性

ONPG試驗

?β-半乳糖苷酶試驗是以有些細(xì)菌可產(chǎn)生β半乳糖苷酶,能分解鄰硝基酚-β半乳糖苷(ONPG),生成黃色的鄰硝基酚。

ONPG試驗

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