微生物檢測中培養(yǎng)基的質量控制
發(fā)布時間：2020-09-25 瀏覽次數：4433
培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質量的優(yōu)劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。環(huán)凱對微生物實驗室在培養(yǎng)基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質量控制措施進行討論，提一些建議。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。
培養(yǎng)基的購置與驗收
1.購置
從培養(yǎng)基自身的質量來看，不同生產廠家的產品，甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》，對培養(yǎng)基的供應企業(yè)進行評價后選擇合格的供應商，這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業(yè);企業(yè)是否通過了質量管理體系的認證是較為客觀的評價指標。要求生產企業(yè)提供：培養(yǎng)基成分名稱及產品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書以及必要的安全/危害數據等材料。
2.驗收
購買的培養(yǎng)基到貨后，應有專人做好接受和驗收工作，應仔細核對生產企業(yè)提供的資料、培養(yǎng)基名稱、規(guī)格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養(yǎng)基到貨物后都應對培養(yǎng)基的質量進行檢測，滿足檢測方法規(guī)定的要求后方可投入使用。
培養(yǎng)基的儲存
干粉培養(yǎng)基應保存在陰涼干燥處，要避免陽光直射;未開瓶的培養(yǎng)基在室溫下的最長保存2年，開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應注意防潮并在6個月內用完。應定期對儲存中的培養(yǎng)基進行常規(guī)檢查，如容器密閉性復查、首次開封日期、內容物的感官檢查，如果培養(yǎng)基發(fā)生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。
培養(yǎng)基的制備
1.培養(yǎng)基用水
培養(yǎng)基制備用水應使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水，最好不使用離子交換器生產的去離子水。
2.稱量
稱量時要用專用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗結果;干粉培養(yǎng)基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。
3.復水
復水時不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養(yǎng)基溢出;含有瓊脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘;加熱培養(yǎng)基時一定要進行攪拌，特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出，對于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質被破壞，并可產生有毒物質，如發(fā)現(xiàn)焦化，或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出，該培養(yǎng)基即不能使用，應重新制備。對于瓊脂類培養(yǎng)基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱，最多只能加熱兩次，第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應棄去。
4.滅菌
一般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌，即高壓蒸汽滅菌，通常是121℃ 15min，含糖或特殊培養(yǎng)基，按照國家標準或生產商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，還會使瓊脂的凝膠強度下降，因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間，并且不可重復滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定，并定期采用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。
5.pH測定
微生物必須在適宜的pH范圍內才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性。培養(yǎng)基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH值，即培養(yǎng)基使用前的pH，并應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量，固體瓊脂培養(yǎng)基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中，如果需要調整培養(yǎng)基的pH，應用1mol/LNa0H或 lmol/LHCL調整，注意不可反復調pH，否則會影響培養(yǎng)基的滲透壓。
6.配制好的培養(yǎng)基保存
滅菌以后培養(yǎng)基應該迅速冷卻至所需溫度，避免長時間保存在滅菌鍋內，造成過度滅菌，影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。所配制的培養(yǎng)基的量，應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養(yǎng)基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完，應于冷藏保存，如果保存時間超過2天，應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時間超過2個星期，應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。
培養(yǎng)基的性能測試
1.外觀控制
制備好的培養(yǎng)基應有相應的顏色，一般的培養(yǎng)基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化，是否蒸發(fā)/脫水。
2.污染控制
從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進行污染測試(無菌試驗)，確定無微生物生長方可使用。
3.性能測試
(1)測試菌株選擇 測試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實驗室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株，應來自國際/國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株，菌株的選擇參考衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質量檢驗規(guī)程》。
(2) 定量測試方法（改良Miles-Misra法） 測試菌株過夜培養(yǎng)物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個區(qū)域并標記;從最高稀釋度開始，分別滴一滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區(qū)域;將稀釋液涂滿整個1/4區(qū)域，37°C培養(yǎng)18小時;對易計數的區(qū)域計數，按公式計算生長率(生長率=待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數/參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數)。非選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.7，該類培養(yǎng)基應易于目標菌生長;選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.1。
(3)半定量測試方法（改進的劃線法接種法） 平板分ABCD四區(qū)，共劃16條線，平行線大概相隔0.5cm，每條有菌落生長的劃線記作1分，每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分，沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半記作0分，分數加起來得到生長指數G。目標菌在培養(yǎng)基上應呈現(xiàn)典型的生長，而非目標菌的生長應部分或完全被抑制，目標菌的生長指數G大于6時，培養(yǎng)基可接受。
(4)定性測試方法（平板接種觀察法） 用接種環(huán)取測試菌培養(yǎng)物，在測試培養(yǎng)基表面劃平行直線。按標準中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度對接種后的平板進行培養(yǎng)，目標菌應呈現(xiàn)良好生長，并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài)，非目標菌應是微弱生長或無生長。
培養(yǎng)基的質量是微生物實驗室檢測工作的基礎，事關檢測工作的準確性、可靠性，在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環(huán)節(jié)的質量問題，都將導致檢驗結果科學性、客觀性的偏離。因此，加強培養(yǎng)基的實驗室質量控制，認真地做好培養(yǎng)基的質控工作，不斷完善和提高培養(yǎng)基的質控水平，才能為微生物檢測實驗室提供高質量的培養(yǎng)基。
