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微生物檢測中培養(yǎng)基的質量控制

發(fā)布時間:2020-09-25    瀏覽次數:4433

      培養(yǎng)是液體、半固體或固體形式的,含天然或合成成分,用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié),培養(yǎng)基自身質量的優(yōu)劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。環(huán)凱對微生物實驗室在培養(yǎng)基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質量控制措施進行討論,提一些建議。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。

培養(yǎng)基的購置與驗收

  1.購置

  從培養(yǎng)基自身的質量來看,不同生產廠家的產品,甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》,對培養(yǎng)基的供應企業(yè)進行評價后選擇合格的供應商,這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業(yè);企業(yè)是否通過了質量管理體系的認證是較為客觀的評價指標。要求生產企業(yè)提供:培養(yǎng)基成分名稱及產品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書以及必要的安全/危害數據等材料。

  2.驗收

  購買的培養(yǎng)基到貨后,應有專人做好接受和驗收工作,應仔細核對生產企業(yè)提供的資料、培養(yǎng)基名稱、規(guī)格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養(yǎng)基到貨物后都應對培養(yǎng)基的質量進行檢測,滿足檢測方法規(guī)定的要求后方可投入使用。

培養(yǎng)基的儲存

  干粉培養(yǎng)基應保存在陰涼干燥處,要避免陽光直射;未開瓶的培養(yǎng)基在室溫下的最長保存2年,開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕,應注意防潮并在6個月內用完。應定期對儲存中的培養(yǎng)基進行常規(guī)檢查,如容器密閉性復查、首次開封日期、內容物的感官檢查,如果培養(yǎng)基發(fā)生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。

培養(yǎng)基的制備

  1.培養(yǎng)基用水

  培養(yǎng)基制備用水應使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水,最好不使用離子交換器生產的去離子水。

  2.稱量

  稱量時要用專用的角匙,避免交叉污染而影響檢驗結果;干粉培養(yǎng)基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。

  3.復水

  復水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養(yǎng)基溢出;含有瓊脂粉的培養(yǎng)基,在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘;加熱培養(yǎng)基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質被破壞,并可產生有毒物質,如發(fā)現(xiàn)焦化,或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出,該培養(yǎng)基即不能使用,應重新制備。對于瓊脂類培養(yǎng)基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱,最多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應棄去。

  4.滅菌

  一般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121℃ 15min,含糖或特殊培養(yǎng)基,按照國家標準或生產商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌,避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分,改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分,還會使瓊脂的凝膠強度下降,因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間,并且不可重復滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定,并定期采用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。

  5.pH測定

  微生物必須在適宜的pH范圍內才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性。培養(yǎng)基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH值,即培養(yǎng)基使用前的pH,并應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量,固體瓊脂培養(yǎng)基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中,如果需要調整培養(yǎng)基的pH,應用1mol/LNa0H或 lmol/LHCL調整,注意不可反復調pH,否則會影響培養(yǎng)基的滲透壓。

  6.配制好的培養(yǎng)基保存

  滅菌以后培養(yǎng)基應該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內,造成過度滅菌,影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。所配制的培養(yǎng)基的量,應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養(yǎng)基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完,應于冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時間超過2個星期,應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。

培養(yǎng)基的性能測試

  1.外觀控制

  制備好的培養(yǎng)基應有相應的顏色,一般的培養(yǎng)基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化,是否蒸發(fā)/脫水。

  2.污染控制

  從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進行污染測試(無菌試驗),確定無微生物生長方可使用。

  3.性能測試

  (1)測試菌株選擇 測試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實驗室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株,應來自國際/國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株,菌株的選擇參考衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質量檢驗規(guī)程》。

  (2) 定量測試方法(改良Miles-Misra法) 測試菌株過夜培養(yǎng)物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個區(qū)域并標記;從最高稀釋度開始,分別滴一滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區(qū)域;將稀釋液涂滿整個1/4區(qū)域,37°C培養(yǎng)18小時;對易計數的區(qū)域計數,按公式計算生長率(生長率=待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數/參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數)。非選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.7,該類培養(yǎng)基應易于目標菌生長;選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.1。

  (3)半定量測試方法(改進的劃線法接種法) 平板分ABCD四區(qū),共劃16條線,平行線大概相隔0.5cm,每條有菌落生長的劃線記作1分,每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分,沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半記作0分,分數加起來得到生長指數G。目標菌在培養(yǎng)基上應呈現(xiàn)典型的生長,而非目標菌的生長應部分或完全被抑制,目標菌的生長指數G大于6時,培養(yǎng)基可接受。

  (4)定性測試方法(平板接種觀察法) 用接種環(huán)取測試菌培養(yǎng)物,在測試培養(yǎng)基表面劃平行直線。按標準中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度對接種后的平板進行培養(yǎng),目標菌應呈現(xiàn)良好生長,并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài),非目標菌應是微弱生長或無生長。

      培養(yǎng)基的質量是微生物實驗室檢測工作的基礎,事關檢測工作的準確性、可靠性,在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環(huán)節(jié)的質量問題,都將導致檢驗結果科學性、客觀性的偏離。因此,加強培養(yǎng)基的實驗室質量控制,認真地做好培養(yǎng)基的質控工作,不斷完善和提高培養(yǎng)基的質控水平,才能為微生物檢測實驗室提供高質量的培養(yǎng)基。

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