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實驗室微生物檢測過程注意事項

發(fā)布時間:2019-11-29    瀏覽次數(shù):3977

一、培養(yǎng)基的滅菌及使用

(1)每次進行培養(yǎng)基配置時,要注意其生產(chǎn)日期是否在保質(zhì)期內(nèi),查看其開瓶日期及瓶口密封性,保證其未變質(zhì),并且未吸潮。

(2)培養(yǎng)基配置時,稱量要準(zhǔn)確,包括鹽水的分裝要準(zhǔn)確。

(3)一定要保證現(xiàn)配制現(xiàn)滅菌,未滅菌的配好培養(yǎng)基不能長時間放置,更不可隔夜。

(4)培養(yǎng)基滅菌時要保證恒溫、恒壓,同時要保證有效滅菌時間。

(5)滅菌過的培養(yǎng)基要冰箱保存,可保存一周,一般不超過 3 天。而且要遵循“先入先出”原則,先配制的培養(yǎng)基要先使用。

(6)在使用時,要根據(jù)當(dāng)班次的使用量,用水浴鍋先將培養(yǎng)基溶化為液態(tài),然后及時調(diào)低水域溫度(先化好的可從水域取出,放在水浴鍋鍋蓋上)待用,千萬不可長時間使培養(yǎng)基處于高溫狀態(tài)。

(7)做產(chǎn)品微生物檢測時,傾倒培養(yǎng)基溫度在 45℃左右,不可過燙,避免將菌燙死;也不可過涼,化好的培養(yǎng)基又結(jié)塊凝固,不便于觀察結(jié)果。

(8)每瓶培養(yǎng)基均要做空白。

(9)盡量集中做樣,避免頻繁打開同一瓶培養(yǎng)基瓶塞,增大培養(yǎng)基的污染幾率,出現(xiàn)誤差結(jié)果。

(10)培養(yǎng)基剩余過少時,可先將其傾倒成空白用板。

二、 做樣環(huán)境的維持

(1)大環(huán)境(房間)

1)微生物檢測做樣時,窗戶和空調(diào)要關(guān)閉,或用酒精對房間進行噴霧消毒,避免房間內(nèi)空氣流通影響安全柜內(nèi)部環(huán)境(最好在有通排風(fēng)系統(tǒng)的恒溫恒濕無菌間進行操作)。

2)如果在原來的原料微生物檢測室進行做樣,要定期開啟紫外燈,對房間進行殺菌。

(2)小環(huán)境(生物安全柜)

1)工作前準(zhǔn)備

a. 首先微生物檢測實驗室生物安全柜打開紫外燈照射30分鐘

b. 關(guān)紫外燈,打開生物安全安全柜的日光燈和風(fēng)機,用消毒劑對生物安全柜的內(nèi)表面進行消毒擦拭

c. 將實驗中需要用到的物品集中用消毒劑擦拭后放在臺面相應(yīng)位置上(切記勿阻擋風(fēng)口?。?/p>

d. 等待5min,凈化工作區(qū)的空氣污染物

2)操作規(guī)范

a. 微生物檢測實驗過程中,雙臂垂直緩慢進入前面的開口,在生物安全柜中等待大約一分鐘,以使安全柜調(diào)整完畢后才可對物品進行處理。

b. 所有操作應(yīng)在離前窗10cm以外的工作區(qū)進行。

c. 廢棄物應(yīng)丟棄在生物安全柜內(nèi)的處理容器中。

3)微生物檢測實驗操作時注意事項

a. 雙避免胳膊在前開口處快速移動和頻繁進出

b. 盡量避免污染的物品進入潔凈區(qū)

c. 避免使用明火干擾氣流,可使用微型電加熱器,最好使用一次性接種環(huán)。

d. 在生物安全柜內(nèi)進行操作時,不能進行文字工作

e. 盡量減少操作者身后的人員活動。

4)工作結(jié)束后的要求

a. 將生物安全柜繼續(xù)運行至少3min來完成“凈化”過程

b. 將柜內(nèi)物品移出前,應(yīng)使用有效的消毒劑擦拭(特別是霉菌)

c. 每天實驗結(jié)束后,對生物安全柜的內(nèi)壁和臺面進行擦拭

d. 等待5分鐘后,關(guān)閉前窗,關(guān)燈,關(guān)風(fēng)機,紫外燈照射30分鐘

三、 工器具的潔凈度

(1)玻璃器皿:采用干熱滅菌方式進行滅菌。

(2)做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣專用,不可與其它操作器具混用,使用時,先用75%酒精消毒,再采用灼燒方式進行滅菌。

(3)接種針(環(huán))采用灼燒方式進行滅菌,但要注意做樣時要先將接種針(環(huán))進行冷卻。

四、樣品的采集及微生物檢測

(1)保證采樣器具的無菌性

1)玻璃器皿:采用干熱滅菌方式進行滅菌,保證恒溫、時間足夠(但不可時間過長,導(dǎo)致玻璃器皿易裂紋而報廢)。

2)取樣筐:使用前要用75%酒精進行噴灑消毒。

3)取樣勺:要保證其清潔消毒,清潔后用75%酒精進行擦拭消毒。

4)取樣袋:可先用酒精進行擦拭消毒,再在安全柜用紫外燈照射消毒,(包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒)。

5)電子稱表面用 75%酒精消毒。

(2)人員操作

1)保證手部的清洗、消毒:取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。

2)取樣要具有代表性(隨機樣、目的樣、綜合樣)且要標(biāo)示清楚。

3)取樣完畢,不可在車間逗留,要及時將樣品放入安全柜,對其外表面進行紫外燈照射消毒。

4)在要求的做樣區(qū)域進行操作。

5)做樣前,要用 75%酒精棉球?qū)悠反诓窟M行擦拭消毒,再開口。

6)往鹽水瓶加樣品時,要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

7)樣品計量要準(zhǔn)確,稀釋倍數(shù)也要準(zhǔn)確(1mL 吸管不允許將管口敲掉),進行 100 倍稀釋時,1mL 吸管要伸入鹽水中,不可以將樣品從管壁流下去,同時要避免將管底部捅破。

8)鹽水溫度以 40℃左右為宜,不能過熱,會將部分微生物燙死;也不能溫度太低,不能將樣品溶解完全。

9)進行稀釋時,要搖勻,保證溶液的均一性。

10)傾倒平皿時,要注意培養(yǎng)基瓶口不要接觸到平皿;傾倒的培養(yǎng)基要適量,不可以太少,在培養(yǎng)過程中干掉,微生物亦死亡,以 15mL 左右為宜。

11)做大腸菌群樣時,要提前將乳糖膽鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)管按需要量備好,放入安全柜對外表面進行紫外線滅菌。

12)接二步時,要注意先將接種針(環(huán))進行冷卻,避免出現(xiàn)接不上菌落的情況發(fā)生,導(dǎo)致無法判斷、確認。

13)做樣完畢,及時放入相應(yīng)培養(yǎng)箱進行培養(yǎng),并清理清潔安全柜。

五、 微生物的培養(yǎng)

(1)在培養(yǎng)過程中,要隨時監(jiān)控培養(yǎng)箱溫度,保證其在適宜的溫度進行培養(yǎng)。

(2)要按照《微生物檢驗規(guī)范》要求及時觀察結(jié)果,出現(xiàn)異常,要及時分析原因進行反饋。


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