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噬菌體擴增結(jié)合環(huán)介導(dǎo)等溫擴增 (PA-LAMP) 用于快速檢測生禽肉中的活腸炎沙門氏菌

發(fā)布時間:2025-05-07      瀏覽次數(shù):23    分享:

沙門氏菌屬是全球主要的食源性病原體之一。該屬由2600多種不同的血清型組成,即鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌,它們主要導(dǎo)致人類沙門氏菌病病例。

Food Microbiology

沙門氏菌可以存在于多種食物中,但雞蛋和肉類等家禽產(chǎn)品是食物鏈中的主要來源。

雞肉的生產(chǎn)具有戰(zhàn)略意義,因為它是最經(jīng)濟的肉類之一,也是全球消費量最大的肉類之一。歐盟在2022年生產(chǎn)了 980 萬噸雞肉,并從巴西、泰國和烏克蘭進口了高價值家禽產(chǎn)品,包括胸肉和家禽制品。歐盟在第1086/2011號法規(guī) (EC)確定了25克新鮮禽肉中不含鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌的標(biāo)準(zhǔn)。

因此,及時檢測沙門氏菌十分重要。

現(xiàn)有的基于 DNA 的技術(shù)檢測方法的一個典型局限性是它們無法區(qū)分活的微生物和非活的微生物。然而噬菌體可以專門感染和復(fù)制活細菌細胞,噬菌體僅在存在目標(biāo)細菌時繁殖,而不是檢測細菌本身,因此基于噬菌體的檢測可以僅僅檢測活菌。

此外,單個噬菌體感染每個細菌細胞會產(chǎn)生數(shù)十到數(shù)百個新的病毒顆粒,從而提高了相同范圍內(nèi)該方法的檢測限。

在本研究中,作者利用沙門氏菌噬菌體vB_SenS_PVP-SE2 (PVP-SE2) 結(jié)合LAMP擴增開發(fā)了一種新的腸炎沙門氏菌檢測方法,噬菌體PVP-SE2的潛伏期為 15分鐘,上升期為15分鐘,每個感染細胞平均有240個后代噬菌體,能夠縮短檢測沙門氏菌所需的富集期。因此,該方法允許在同一天 (8 h) 檢測活細胞。并將該方法在加標(biāo)雞胸肉樣品中進行了評估。

熒光可視化圖片

圖 1 熒光可視化圖片 

結(jié)論:該研究成功開發(fā)了用于檢測雞胸肉中活腸炎沙門氏菌的PA-LAMP 測定法。在大約8小時內(nèi),包括樣品預(yù)富集、DNA 提取和LAMP,可以檢測到 1.1 CFU/25 g 的食品樣品。這使得該方法適用于當(dāng)天檢測。此外,熒光可視化方法的開發(fā)允許該方法應(yīng)用于現(xiàn)場檢測??偠灾狙芯块_發(fā)了一種新的、快速的、簡單的、非技術(shù)要求高且經(jīng)濟的方法,可以在同一個工作日內(nèi)檢測出活腸炎沙門氏菌,其結(jié)果與參考方法(ISO 6579)相當(dāng)。

參考來源:Lamas A, Santos SB, Prado M, Garrido-Maestu A. Phage amplification coupled with loop-mediated isothermal amplification (PA-LAMP) for same-day detection of viable Salmonella Enteritidis in raw poultry meat. Food Microbiol. 2023 Oct;115:104341. doi: 10.1016/j.fm.2023.104341. Epub 2023 Jul 11. PMID: 37567642.

來源:微生物安全與健康網(wǎng),作者~翟慧潺。

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