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金黃色葡萄球菌檢測(cè)在食品行業(yè)中至關(guān)重要。金黃色葡萄球菌是人類(lèi)的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬，有“嗜肉菌"的別稱(chēng)，是革蘭氏陽(yáng)性菌的代表，可引起許多嚴(yán)重感染。而對(duì)于金黃色葡萄球菌在速凍食品中的存在量，衛(wèi)生部公布食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《速凍面米制品》，允許金葡菌限量存在，也對(duì)金黃色葡萄球菌檢測(cè)做了相關(guān)規(guī)定。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備耗材
吸管(1ml、10ml)、恒溫培養(yǎng)箱(36±1℃)、冰箱、均質(zhì)器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡、接種棒等
培養(yǎng)基和試劑
金黃色葡萄球菌檢測(cè)需要用到試劑為：普通肉湯培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆肉湯、Baird-Prker瓊脂平板、緩沖蛋白胨水(BP)、凝固酶試驗(yàn)凍干血漿
檢驗(yàn)程序(非選擇性增菌法)
檢樣25g+225mlBP胨水
10ml勻液+10ml雙料胰胨肉湯
金黃色葡萄球菌檢測(cè)操作步驟
1.稱(chēng)取25g固體樣品;吸取25mL液體樣品，加入225mLBP胨水，固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成混懸液。
2.吸取10mL上述混懸液，接種于10mL雙料胰蛋白胨大豆肉湯中，置36±1℃培養(yǎng)2h。
3.再加入20ml 含20%NaCl的單料胰蛋白胨大豆肉湯，置36±1℃培養(yǎng)24±2h。
4.劃線轉(zhuǎn)種2個(gè)表面干燥的Baird-Parker瓊脂平板上，36±1℃培養(yǎng)46±2h。
5.挑取可疑菌落移種到肉湯培養(yǎng)基中，置36±1℃溫箱培養(yǎng)24h。
6.取肉湯培養(yǎng)物0.3ml同0.5ml凝固酶試驗(yàn)凍干血漿于8mm*100mm試管內(nèi)充分混合，置36±1℃培養(yǎng)，定時(shí)觀察是否有凝塊形成，至少觀察6h，以?xún)?nèi)容物完全凝固，使試管倒置或傾斜時(shí)不流動(dòng)為陽(yáng)性。試驗(yàn)中需同時(shí)做已知陽(yáng)性和陰性對(duì)照。對(duì)可疑結(jié)果，應(yīng)進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢和其他輔助試驗(yàn)。
7.本菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌，排列是葡萄球狀，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑約為0.5～1μm。在Baird-Parker平板上為圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、直徑為2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周?chē)鸀橐换鞚釒?，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹(shù)膠的硬度，偶然會(huì)遇到非脂肪溶解的類(lèi)似菌落;但無(wú)混濁帶及透明圈。
8.報(bào)告結(jié)果，如發(fā)現(xiàn)有凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性的菌落，即報(bào)告1g(ml)食品中有金黃色葡萄球菌存在，否則為陰性。
