無菌接種操作 — 微生物斜面接種操作要點
發(fā)布時間：2024-10-23 瀏覽次數(shù)：1848
接種是微生物檢驗技術(shù)的最基本操作，微生物的傳代和擴(kuò)大培養(yǎng)都需要接種或移種。接種是指將微生物接到適合其生長的營養(yǎng)物上使微生物繁殖的操作。
移種是指將已培養(yǎng)好的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到新鮮的培養(yǎng)基中，使其進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)和生長繁殖的操作。接種工具常用的有接種針、接種環(huán)、移液管等。
接種過程是一個無菌過程，接種工具、接種環(huán)境以及培養(yǎng)基都應(yīng)該保證無菌。
今天我們介紹一下斜面直接接種的操作，具體操作如下：
一、斜面劃線
具體操作見下圖：
1）將菌種管和待接種斜面試管握在左手中，試管底接觸掌心。斜面一面向上，并處于接近水平位置。
2）先菌種和待接種斜面試管的棉塞旋轉(zhuǎn)一下，以便接種時易于拔出。右手以拿筆或拿毛筆的姿勢捏住接種環(huán)金屬柄，將要伸入試管部分的金屬柄和金屬絲在酒精燈火焰外焰上灼燒滅菌。
3）用右手小指、無名指和手掌下沿將兩管的棉塞同時夾住并拔出，棉塞不得接觸任何物品，更不得放在桌面上。
4）再將兩個試管口在火焰上灼燒。將灼燒過的接種環(huán)伸入接種管內(nèi)。使接種環(huán)在試管內(nèi)壁上冷卻，然后用接種環(huán)在菌苔上刮取少許后抽出，抽出時勿與試管壁相碰，也不要通過火焰。
5）迅速將粘有菌種的接種環(huán)伸入待接種斜面試管內(nèi)，自斜面底部向上往復(fù)“之”字劃線，注意不要劃破瓊脂。
6）劃線完畢后將接種環(huán)抽出，灼燒管口，塞上棉塞。塞棉塞時勿用試管口去迎棉塞，以免試管離開火焰周圍無菌環(huán)境時污染雜菌。檢查試管塞是否塞緊后將其放于試管架上。火焰灼燒接種環(huán)。
二、斜面穿刺
這里提到的斜面穿刺是指固體高斜面穿刺，如下圖。
這是把目標(biāo)菌苔通過接種針接種到固體培養(yǎng)基內(nèi)部和斜面上的一種接種方法。沙門氏穿刺接種三糖鐵斜面的操作就屬這種情況。穿刺固體培養(yǎng)基是為了觀察細(xì)菌在深層培養(yǎng)基中生長和代謝的情況。
操作時用筆直的接種針，從長有目標(biāo)菌的培養(yǎng)基上挑取少量菌苔。將接種針平穩(wěn)刺入培養(yǎng)基，勿觸到管底（距離試管底部大約2mm~3mm），也不可碰到試管內(nèi)壁，然后沿原穿刺途徑慢慢抽出接種針，最后在斜面上進(jìn)行“之”字劃線。
這里需要特別注意的是：斜面劃線和穿刺操作一定針對純培養(yǎng)物，否則實驗操作是無意義的。劃線或穿刺的目的是為了將純培養(yǎng)物二次傳代培養(yǎng)。這種操作也見于標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)壯或傳代。整個操作過程中要嚴(yán)格規(guī)范操作，嚴(yán)格控制交叉污染。
文章來源：“食品微生物檢測”公眾號；
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