用于檢測(cè)副溶血性弧菌和其他弧菌的靈敏和特異性顯色培養(yǎng)基的研制
發(fā)布時(shí)間：2024-09-06 瀏覽次數(shù)：45
大多數(shù)副溶血性弧菌菌株對(duì)人類無致病性，但致病性亞型已引起流行病和大流行，因此該物種在許多國家被認(rèn)為是重要的食源性病原體。在弧菌屬中，副溶血性弧菌是大多數(shù)弧菌相關(guān)感染的原因。因此，準(zhǔn)確區(qū)分弧菌和檢測(cè)副溶血性弧菌對(duì)確保食品供應(yīng)安全至關(guān)重要。盡管分子技術(shù)越來越普遍，但依賴培養(yǎng)的方法仍然是常規(guī)的，在某些情況下，它們被視為標(biāo)準(zhǔn)方法。
通常，TCBS培養(yǎng)基是用于分離和檢測(cè)副溶血性弧菌、霍亂弧菌和創(chuàng)傷弧菌的選擇性和差異培養(yǎng)基。然而，據(jù)報(bào)道，該培養(yǎng)基存在局限性，例如無法將霍亂弧菌與其他弧菌物種區(qū)分開來。此外，蔗糖和pH指示劑是TCBS的分化，正發(fā)酵反應(yīng)伴隨著pH指示劑溴百里酚藍(lán)的顏色變化，但培養(yǎng)基的著色是TCBS的缺點(diǎn)，因?yàn)樗赡軙?huì)模糊對(duì)菌落形態(tài)的觀察。因此，需要開發(fā)具有更好靈敏度和特異性的替代培養(yǎng)基，用于檢測(cè)和分離副溶血弧菌和其他近親菌種。
該研究測(cè)試了一種新配制的顯色瓊脂培養(yǎng)基，目的是提供一種更好的分離和區(qū)分臨床相關(guān)弧菌的方法。這項(xiàng)研究評(píng)估了新顯色培養(yǎng)基檢測(cè)和分離霍亂弧菌、副溶血弧菌和創(chuàng)傷弧菌的能力，特別是其將副溶血性弧菌與其他物種區(qū)分開來的能力。并比較了新顯色培養(yǎng)基和常規(guī)培養(yǎng)基檢測(cè)副溶血性弧菌的靈敏度、特異性和檢測(cè)限。
在這項(xiàng)研究中，共54個(gè)微生物菌株，其中包括副溶血弧菌屬22個(gè)菌株、19個(gè)其他弧菌屬和13個(gè)非弧菌屬(表1)。
進(jìn)行了四項(xiàng)單獨(dú)的試驗(yàn)，以確定菌株在TCBS上的生長和菌落形態(tài)(圖1)。
測(cè)試了一種新的顯色培養(yǎng)基從食品和環(huán)境樣品中選擇臨床相關(guān)弧菌物種的能力。此外，評(píng)估了該培養(yǎng)基同時(shí)區(qū)分這些物種的能力(圖2)。如表1所示，TCBS和顯色瓊脂對(duì)非弧菌微生物都表現(xiàn)出一定程度的選擇性。
按照過夜培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法，在接受最高稀釋因子(即df=10-8)的顯色瓊脂平板上觀察到副溶血性弧菌的菌落。這些結(jié)果與非選擇性培養(yǎng)基(TSAS)上的結(jié)果相當(dāng)。表明顯色培養(yǎng)基的檢測(cè)限與非選擇性培養(yǎng)基相似，在沒有食物基質(zhì)的情況下約為10個(gè)細(xì)胞或更低。與非選擇性培養(yǎng)基相比，其他弧菌物種如溶藻弧菌、河弧菌和少女弧菌的檢測(cè)能力也不錯(cuò)。然而，一些霍亂弧菌、創(chuàng)傷弧菌和擬態(tài)弧菌菌株在顯色瓊脂上產(chǎn)生的菌落減少了10至100倍。在顯色或其他選擇性培養(yǎng)基中使用的選擇性試劑不可避免地抑制某些細(xì)胞。例如，受損的細(xì)胞在選擇性培養(yǎng)基中無法恢復(fù)。盡管如此，在大多數(shù)采用濃縮步驟的常規(guī)程序中，檢測(cè)能力稍差并不是問題。食品或環(huán)境樣品中的少量微生物會(huì)在濃縮液中大量繁殖，超過檢測(cè)限。通常在堿性蛋白胨水中進(jìn)行富集，以確定環(huán)境樣品中弧菌種類的流行率。
在存在牡蠣勻漿的情況下，顯色瓊脂繼續(xù)顯示出良好的回收率。換句話說，很大比例(>70%)的副溶血性弧菌細(xì)胞能夠在生色瓊脂上生長，不受牡蠣基質(zhì)的影響(圖3a)。副溶血性弧菌細(xì)胞的生長和恢復(fù)也不受另一種弧菌的影響(圖3b)。這是一個(gè)重要的屬性，因?yàn)榄h(huán)境樣品必然含有不同的弧菌種類，特別是在富集程序之后，這些種類的數(shù)量很高。
為了進(jìn)一步比較顯色瓊脂和TCBS瓊脂，計(jì)算了敏感性和特異性。表2顯示了這些培養(yǎng)基準(zhǔn)確識(shí)別副溶血性弧菌的能力。敏感性與真陽性率有關(guān)，這意味著副溶血性弧菌菌株在培養(yǎng)基上產(chǎn)生了預(yù)期的菌落形態(tài)。特異性與真陰性的百分比有關(guān)，這意味著非副溶血性弧菌菌株應(yīng)表現(xiàn)出較差或無生長，或與副溶血弧菌不同的菌落形態(tài)。TCBS對(duì)副溶血性弧菌的敏感性和特異性分別為86.4%和71.8%。相比之下，顯色培養(yǎng)基的敏感性和特異性分別為90.9%和96.9%。
使用顯色培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)是周圍培養(yǎng)基的著色最小，從而有助于分離特定菌落。新開發(fā)的顯色培養(yǎng)基利用高pH值和高鹽度來抑制許多海洋樣品中發(fā)現(xiàn)的非弧菌物種的生長。新的顯色培養(yǎng)基的最終pH值為8.6±0.2。每升去離子水含有10克蛋白胨、10克海鹽混合物、10克牛膽、10克硫代硫酸鈉、5克酵母提取物、5克檸檬酸鈉、2.2克碳酸鈉、2克乳糖、0.5克丙酮酸鈉、0.3克顯色混合物和15克瓊脂。顯色混合物允許弧菌根據(jù)其產(chǎn)生某些酶的不同能力進(jìn)行分化。不同的弧菌在新的顯色培養(yǎng)基上表現(xiàn)出不同的菌落顏色，而不是改變TCBS瓊脂培養(yǎng)基的顏色。
顯色培養(yǎng)基在副溶血性弧菌的鑒定中表現(xiàn)出比TCBS更好的性能，其敏感性和特異性分別為90.9%和96.9%，高于TCBS(分別為86.4%和71.9%)。除此以外，該研究中使用的顯色瓊脂還可以區(qū)分比TCBS更多的弧菌種類，因?yàn)榕囵B(yǎng)基配方中包含顯色混合物，產(chǎn)生多種顏色。總之，新的顯色瓊脂是檢測(cè)副溶血性弧菌并將其與其他弧菌區(qū)分開來的有效培養(yǎng)基。
來源：微生物安全與健康網(wǎng)。
