用于沙門氏菌超快速目視檢測的單管分析
發(fā)布時間：2024-06-21 瀏覽次數(shù)：329
沙門氏菌是引起食源性疾病的重要病原菌之一。據(jù)統(tǒng)計在世界各國的種類細(xì)菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首。我國內(nèi)陸地區(qū)也以沙門氏菌為首位。當(dāng)沙門氏球菌侵入人體后，人們可能會在12-72小時內(nèi)出現(xiàn)腹瀉、腹痛、嘔吐、發(fā)燒，偶爾還會死亡。因此，做好對沙門氏菌的檢測，防止“病從口入”還是非常重要的。
什么是沙門氏菌？
沙門氏菌是沙門氏菌病的病原體。屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌。在水中不易繁殖，但可生存2-3周，冰箱中可生存3-4個月，在自然環(huán)境的糞便中可存活1-2個月。沙門氏菌很容易污染肉類、蛋類和乳制品等食品以及蔬菜和水果的表面。人們可能會在攝入受污染的食物后12-72小時內(nèi)出現(xiàn)腹瀉、腹痛、嘔吐、發(fā)燒，偶爾還會死亡。因此，該菌的存在嚴(yán)重影響食品安全，對消費(fèi)者健康構(gòu)成威脅。因此，快速檢測食品中的沙門氏菌對食品安全和人體健康至關(guān)重要。
怎么檢測沙門氏菌？
迄今為止，培養(yǎng)法、酶聯(lián)免疫吸附法、分子生物學(xué)檢測等方法主要用于不同基質(zhì)中食源性致病菌的檢測。傳統(tǒng)的基于培養(yǎng)的沙門氏菌檢測方法耗時，通常需要2-5天。核酸聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的實(shí)時熒光擴(kuò)增檢測在病原體診斷中表現(xiàn)出優(yōu)異的性能。然而，PCR需要1.5—2小時才能實(shí)現(xiàn)溫度上升和冷卻，這很難用于需要快速讀取結(jié)果的現(xiàn)場檢測場景。因此，建立一種靈敏快速的沙門氏菌檢測方法顯得尤為重要。
在本文中，作者建立了一種本研究建立了基于CDE的單管AC-PCR方案。該方案集成了原位DNA提取，擴(kuò)增，和可視化的超快速檢測沙門氏菌。殼聚糖在pH = 5.0時帶正電荷，可通過靜電相互作用有效提取沙門氏菌DNA。為了簡化提取步驟，本文的單管方案利用殼聚糖功能化DE的自沉淀特性，在3 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)無離心提取。
圖 1 檢測原理圖
結(jié)論：本文的方案可以直接從生物樣品中提取DNA，避免了大量的結(jié)合、洗滌、硅基柱洗脫等耗時的操作和試劑浪費(fèi)?；贑DE的單管方案不僅克服了傳統(tǒng)核酸提取方法的許多固有問題，而且將后續(xù)擴(kuò)增方法的檢出限降低了100倍。基于CDE的單管AC-PCR方案滿足沙門氏菌檢測的所有主要要求，包括無擴(kuò)增干擾、核酸富集能力強(qiáng)、靈敏度高。該系統(tǒng)在人工感染樣本的檢測中也表現(xiàn)出了優(yōu)異的性能，可以很容易、直觀地區(qū)分陽性和陰性樣本，該系統(tǒng)將為食源性病原體檢測和福利點(diǎn)檢測(POCT)提供新的線索。
參考文獻(xiàn)：Zhao X, Wan Q, Zhang J, Duan Y, Li Y, Ma J, Shi C, Ma C. Single-tube analysis for ultra-fast and visual detection of Salmonella. Anal Bioanal Chem. 2022 Mar;414(7):2333-2341. doi: 10.1007/s00216-022-03904-z. Epub 2022 Jan 25. PMID: 35079852; PMCID: PMC8788404.
環(huán)凱轉(zhuǎn)載于微健網(wǎng)，原文鏈接：https://www.mbiosh.com/column/testing-technology/testing-technology-method/3258
