飲用水中銅綠假單胞菌的污染、控制及檢驗(yàn)
發(fā)布時(shí)間：2024-01-10 瀏覽次數(shù)：716
我們經(jīng)常看見這樣的報(bào)道，某某飲用水廠商的一批飲用水中被查出銅綠假單胞菌超標(biāo)，飲用水呈綠色，網(wǎng)友們紛紛調(diào)侃，水都不能喝了，該怎么生存？那么銅綠假單胞菌到底是什么？它是如何進(jìn)入到飲用水中的？我們該如何預(yù)防這種細(xì)菌的侵害？
銅綠假單胞菌（P.Aeruginosa）：一種重要的水源性致病菌，廣泛存在于各類型水中，對消毒劑、干燥、紫外線等理化因素及不良環(huán)境具有很強(qiáng)的抵抗力；作為條件致病菌，可能引起急性腸道炎、腦膜炎、敗血癥和皮膚炎癥等疾病。因此，監(jiān)測分析其污染原因并進(jìn)行有效控制顯得尤為重要。
1 銅綠假單胞菌如何進(jìn)入飲用水中的？
瓶（桶）裝水中銅綠假單胞菌的污染主要原因有水源受到污染，或現(xiàn)有的較為簡單的水生產(chǎn)加工工藝；或生產(chǎn)過程中衛(wèi)生控制不嚴(yán)格，從業(yè)人員未經(jīng)消毒的手直接與礦泉水或容器內(nèi)壁接觸；或包裝材料未進(jìn)行徹底清洗消毒。
2 銅綠假單胞菌（P.Aeruginosa）檢驗(yàn)
檢查食品（飲用水）中的銅綠假單胞菌成為食品抽檢必不可少的檢測項(xiàng)目，以檢測飲用水為例列舉銅綠假單胞菌的檢測方法（GB 8538-2022 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法）：
一、檢驗(yàn)流程：
二、操作步驟：
1.水樣過濾：用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，固定好濾器，將250mL水樣或稀釋液通過孔徑0.45μm的濾膜過濾（環(huán)凱 20571102 0.45um微孔濾膜(無菌,混合纖維素CN-CA) 200片/盒），然后將過濾后的濾膜貼在已制備好的CN瓊脂平板上，平鋪并避免在濾膜和培養(yǎng)基之間夾留著氣泡。
2.培養(yǎng)：將平板倒置于36℃±1℃培養(yǎng)20 h~48 h，并防止干燥。
3.結(jié)果觀察
在培養(yǎng)20 h~24 h和40 h~48 h后觀察濾膜上菌落的生長情況并計(jì)數(shù)。
計(jì)數(shù)所有顯藍(lán)色或綠色(綠膿色素)疑似銅綠假單胞菌的菌落，并進(jìn)行綠膿菌素確證性試驗(yàn)。
在紫外線下檢查濾膜時(shí)，應(yīng)避免長時(shí)間在紫外光下照射，否則可能會將平板上的菌落殺滅，而導(dǎo)致無法在證實(shí)培養(yǎng)基上生長。計(jì)數(shù)濾膜上所有發(fā)熒光不產(chǎn)綠膿色素疑似銅綠假單胞菌菌落，并進(jìn)行乙酰胺肉湯確證性試驗(yàn)。
將其他所有紅褐色不發(fā)熒光的菌落進(jìn)行氧化酶測試、42℃生長、乙酰胺液體培養(yǎng)基、金氏B培養(yǎng)基確證性試驗(yàn)，培養(yǎng)20 h~24 h觀察結(jié)果，防止因?yàn)榕囵B(yǎng)40 h~48 h導(dǎo)致菌落過分生長而出現(xiàn)菌落融合。
在CN瓊脂上生長的菌落選擇和驗(yàn)證步驟見表30。
三、生化鑒定
1、若CN板上是藍(lán)綠色（如下圖）疑似銅綠假單胞菌的菌落，需進(jìn)行綠膿菌素確證性試驗(yàn)
綠膿菌素試驗(yàn)：將在CN瓊脂上呈藍(lán)色或綠色菌落的純培養(yǎng)物分別接種在綠膿菌素測定培養(yǎng)基上，置36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，加入三氯甲烷3mL~5mL，可搗碎培養(yǎng)基并充分振蕩使培養(yǎng)物中的綠膿菌素溶解于三氯甲燒，待三氯甲烷提取液呈藍(lán)色時(shí)，用吸管將三氯甲烷移到另一試管中，并加入1 mol/L的鹽酸1 ml，振蕩后靜置片刻。如上層鹽酸液內(nèi)出現(xiàn)粉紅色到紫紅色時(shí)為陽性,表示被檢物中有綠膿菌素存在。
1.1 綠膿菌素測定培養(yǎng)基中加入三氯甲烷后的顏色（如下圖）
1.2 用吸管將三氯甲烷移到另一試管內(nèi)加入鹽酸，振蕩，靜置（如下圖）
1.3 藍(lán)色菌落呈粉紅色，綠色菌落呈淡粉色，有綠膿菌素存在。
2、若CN板上有熒光（如下圖）
按照GB8538-2022標(biāo)準(zhǔn)，將在CN瓊脂上發(fā)熒光，非藍(lán)色且非綠色菌落，或不發(fā)熒光、紅褐色菌落純培養(yǎng)物接種到乙酰胺液體培養(yǎng)基中，在36 ℃±1 ℃下培養(yǎng)20 h~24 h。然后向每支試管培養(yǎng)物加入1滴~2滴鈉氏試劑，10 s內(nèi)檢查各試管的顏色變化，如表現(xiàn)出從黃色到磚紅色的顏色變化，則為陽性結(jié)果，否則為陰性。
3、若CN板上是紅褐色
按照GB8538-2022標(biāo)準(zhǔn)，紅褐色菌落要進(jìn)行產(chǎn)氨試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)、42℃生長試驗(yàn)、金氏B產(chǎn)熒光試驗(yàn)。
鑒于本人經(jīng)驗(yàn)有限，接觸樣品不多，買的標(biāo)準(zhǔn)菌株也是綠色形態(tài)（前面那株藍(lán)色菌落也是樣品中發(fā)現(xiàn)的，甚是寶貴）。所以，至今未見過紅褐色菌落，若有同行有檢出或者見過，還望交流，多加學(xué)習(xí)。
3.1標(biāo)準(zhǔn)菌株形態(tài)（如下圖）
3.2產(chǎn)氨實(shí)驗(yàn)（同上，略）
3.3氧化酶試驗(yàn)（如下圖）
取2滴~3滴新鮮配制的氧化酶試劑滴到放于平皿里的潔凈濾紙上。用鉑/鉉，玻璃或其他適宜材質(zhì)的接種環(huán)(棒)，將適量的CN瓊脂上不發(fā)熒光，紅褐色菌落的純培養(yǎng)物涂布在預(yù)備好的濾紙上。在10 s內(nèi)顯深藍(lán)紫色的視為陽性反應(yīng)。
3.4金氏B產(chǎn)熒光試驗(yàn)（如下圖）
將在CN瓊脂上不發(fā)熒光、紅褐色且氧化酶反應(yīng)呈陽性的培養(yǎng)物接種于金氏B培養(yǎng)基上，于36℃±1℃恒溫箱培養(yǎng)1d~5d。每天需取出在紫外燈下檢查其是否產(chǎn)生熒光，將5d內(nèi)產(chǎn)生熒光的菌落記錄為陽性。
3.5 42℃生長試驗(yàn)
將在CN瓊脂上發(fā)熒光、非藍(lán)色且非綠色菌落的純培養(yǎng)物接種營養(yǎng)瓊脂平板上，42℃±1℃培養(yǎng)24 h~-48 h，能生長的為陽性結(jié)果，否則為陰性。
4、其他
其他非前面三種，則判斷不是銅綠假單胞菌。
來源：環(huán)凱轉(zhuǎn)載于“食品微生物檢測”公眾號，文章來源食品論壇網(wǎng)友原創(chuàng)分享，文章版權(quán)歸原作者所有；
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