根據(jù)孔數(shù)、形狀、處理方式、顏色選擇細(xì)胞培養(yǎng)板的方法
發(fā)布時間：2023-12-13 瀏覽次數(shù)：2348
細(xì)胞培養(yǎng)是一種基本的生命科學(xué)研究技術(shù)，已成為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究的重要手段。細(xì)胞培養(yǎng)板是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常用和重要的實(shí)驗(yàn)室耗材，選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)板對細(xì)胞的生長和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性有至關(guān)重要的影響。
細(xì)胞培養(yǎng)板根據(jù)底部形狀的不同可分為平底、圓底（U型）和V底（V型）；培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等；表面處理方式有TC處理和超低吸附處理；顏色有透明色、白色、黑色等。那么如何從這么多的規(guī)格中選擇適合實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)板呢？
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孔數(shù)的選擇
細(xì)胞培養(yǎng)板的孔數(shù)包含6孔、12孔、24孔、48孔、96孔和384孔。不同孔數(shù)的培養(yǎng)板能培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量不同（見表1），最終的應(yīng)用場景也會不同。如何選擇孔數(shù)主要根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需的通量水平以及具體的實(shí)驗(yàn)要求來決定。例如WB、流式檢測相關(guān)實(shí)驗(yàn)，需要較多的細(xì)胞樣本量，最終的檢測通量較低，一般會選擇6孔板、24孔板；又如CTG實(shí)驗(yàn)、CCK8實(shí)驗(yàn)、MTT實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)通量較高，最終的檢測手段可以實(shí)現(xiàn)自動化，多數(shù)可以選擇96孔板或者384孔板。
| 培養(yǎng)板類型 | 面積（cm2） | 培養(yǎng)液量（mL） | 細(xì)胞量 |
|---|---|---|---|
| 6孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 9.6 | 2.5 | 2.5×106 |
| 12細(xì)胞孔培養(yǎng)板 | 4.5 | 2.0 | 106 |
| 24細(xì)胞孔培養(yǎng)板 | 2 | 1.0 | 5×105 |
| 96細(xì)胞孔培養(yǎng)板 | 0.32 | 0.1 | 105 |
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底部形狀的選擇
細(xì)胞培養(yǎng)板根據(jù)底部形狀的不同主要分為平底、圓底（U型）和V底（V型）三大種。平底可用于任何類型細(xì)胞培養(yǎng)，是我們?nèi)粘＜?xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中使用最多的。一般針對特殊實(shí)驗(yàn)需求會用到圓底（U型）和V底（V型）培養(yǎng)板，日常實(shí)驗(yàn)中用的較少。圓底（U型）多用于培養(yǎng)懸浮細(xì)胞，例如免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)需要兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時，需要二者相互接觸以刺激，圓底（U型）板可利用重力將細(xì)胞聚集在小范圍內(nèi)。V底（V型）板中細(xì)胞緊密接觸，一般用于細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)，可使有效靶細(xì)胞緊密接觸[也可用圓底（U型）板替代，加入細(xì)胞后，低速離心即可]。
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表面處理方式的選擇
細(xì)胞培養(yǎng)板的處理方式主要有TC處理和超低吸附處理。選擇哪種表面處理方式，主要取決于培養(yǎng)的細(xì)胞是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)板一般采用的原材料是聚苯乙烯，這一材料具有疏水性。對于貼壁細(xì)胞而言，需要貼附在親水表面?zhèn)饶苌L。
經(jīng)過TC處理的細(xì)胞培養(yǎng)板，表面改性后更適合貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。超低吸附處理是將特殊的兩性分子聚合物鍍膜至培養(yǎng)板表層，可有效抑制細(xì)胞附著，從而滿足懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的需求。因此對于貼壁細(xì)胞可選擇TC處理細(xì)胞培養(yǎng)板，對于懸浮細(xì)胞可選擇超低吸附處理細(xì)胞培養(yǎng)板或者未經(jīng)任何處理的細(xì)胞培養(yǎng)板。
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細(xì)胞培養(yǎng)板顏色的選擇
細(xì)胞培養(yǎng)板的顏色與應(yīng)用息息相關(guān)。細(xì)胞培養(yǎng)板的顏色主要有透明、白色、黑色。如果用相差顯微鏡或肉眼觀察細(xì)胞，可選擇透明的細(xì)胞培養(yǎng)板。對于可見光光譜以外的應(yīng)用（如冷光或熒光），就必須使用有顏色的細(xì)胞培養(yǎng)板（如白色或黑色）的。
在使用從頂部讀數(shù)的儀器時，底部應(yīng)該是不透明的，而使用顯微鏡或底部讀數(shù)的儀器時，應(yīng)選擇底部透明的培養(yǎng)板。冷光樣品通常選擇白色表面，以便最大限度提高信號的反射率，而大于300nm的熒光應(yīng)用時通常使用黑色表面，以吸收激發(fā)信號。同時有顏色的表面還可以防止相鄰孔之間的信號串?dāng)_。具體應(yīng)用所采用的不同顏色培養(yǎng)板總結(jié)如下：
1）發(fā)光檢測（冷光）—白色細(xì)胞培養(yǎng)板，以便最大限度提高信號的反射率；
2）熒光檢測（熒光）—黑色細(xì)胞培養(yǎng)板，以吸收激發(fā)信號，可以防止相鄰孔之間的信號串?dāng)_；
3）頂部讀數(shù) —底部不透明的細(xì)胞培養(yǎng)板。
顯微鏡或底部讀數(shù)—底部透明的細(xì)胞培養(yǎng)板。
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細(xì)胞培養(yǎng)板與酶標(biāo)板的使用辨別
酶標(biāo)板作為固相載體對抗原、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附起著重要作用，可廣泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braford/Lowry)，酶活、酶動力學(xué)檢測，酶聯(lián)免疫測定(ELISAs)，細(xì)胞增殖與毒性分析，細(xì)胞凋亡檢測(MTT)，報告基因檢測及G蛋白偶聯(lián)受體分析(GPCR)等實(shí)驗(yàn)。相比于細(xì)胞培養(yǎng)板，酶標(biāo)板需要盡量降低實(shí)驗(yàn)誤差，制作要求高，價格也相對較高。96孔細(xì)胞培養(yǎng)板和酶標(biāo)板有一定的功能交叉，它們使用上有哪些區(qū)分呢？
1、細(xì)胞培養(yǎng)板可以當(dāng)酶標(biāo)板使用嗎？
當(dāng)測試可見光波長的吸收值時，大多數(shù)96孔板透明板都可以用。但是當(dāng)測試高精度和特殊波長，為避免孔板產(chǎn)生的吸收造成的影響就要用特殊的酶標(biāo)板。
2、酶標(biāo)板可以當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)板使用嗎？
酶標(biāo)板沒有進(jìn)行貼壁處理，是不可以用來培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的。
3、測吸光度可以用細(xì)胞培養(yǎng)板嗎？
細(xì)胞培養(yǎng)板可以進(jìn)行吸光度的檢測，經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量等。
來源：環(huán)凱轉(zhuǎn)載于公眾號：“Labs科技匯”，文章來源于《Super Lab》；
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