實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)沙門氏菌的關(guān)鍵控制要點(diǎn)分享
發(fā)布時(shí)間：2022-04-22 瀏覽次數(shù)：1802
實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)沙門氏菌的關(guān)鍵控制要點(diǎn)分享
沙門氏菌的檢測(cè)在國(guó)內(nèi)的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中幾乎全部都有所涉及，《GB 29921-2021 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中致病菌限量》標(biāo)準(zhǔn)在2021年11月實(shí)施，國(guó)內(nèi)預(yù)包裝產(chǎn)品的致病菌項(xiàng)目中的沙門氏菌檢驗(yàn)項(xiàng)目越來(lái)越嚴(yán)格，現(xiàn)在需要檢驗(yàn)5份樣品，每份都不得檢出才能報(bào)告合格結(jié)果。這一限量標(biāo)準(zhǔn)的變化也增加了食品生產(chǎn)企業(yè)對(duì)生產(chǎn)環(huán)節(jié)的要求，同樣也增加了一線檢驗(yàn)人員的工作量。
現(xiàn)在市面上雖然已經(jīng)有很多沙門氏菌的快速檢測(cè)方法，但是對(duì)于國(guó)內(nèi)大部分企業(yè)或者第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)來(lái)說(shuō)，用的最多的應(yīng)該還是《GB 4789.4-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》這一傳統(tǒng)的方法。下面就跟大家交流一下我們?cè)谌粘z測(cè)沙門氏菌需要注意的一些問(wèn)題，如果有什么地方說(shuō)得不對(duì)的也請(qǐng)大家批評(píng)指正。
一、硬件方面
沙門氏菌的檢測(cè)要在二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（需要配備生物安全柜）中進(jìn)行，特別是有檢出疑似菌進(jìn)行生化鑒定以及血清學(xué)鑒定的時(shí)候，切記一定要在生物安全柜中進(jìn)行操作，并做好相應(yīng)的使用記錄。
二、培養(yǎng)基、生化試劑及血清方面
目前食品微生物檢測(cè)所涉及的培養(yǎng)基和生化試劑等都需要根據(jù)《GB4789.28食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》進(jìn)行質(zhì)量控制及驗(yàn)收。沙門氏菌檢測(cè)中所用到的BS平板、XLD平板、沙門顯色平板、TSI等培養(yǎng)基，還有生化鑒定試劑盒以及O多價(jià)診斷血清A-F，H多價(jià)診斷血清都需要使用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證實(shí)驗(yàn)室最終檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，這里因?yàn)樯婕暗綐?biāo)準(zhǔn)菌株的使用，需要在生物安全柜中操作，相應(yīng)的記錄也要有。
另外，用于二次選擇增菌的TTB和SC培養(yǎng)基，以及用于選擇分離的BS、XLD培養(yǎng)基建議現(xiàn)配現(xiàn)用，需要注意的是配制的時(shí)候只需要加熱煮沸即可，這里建議盛裝的容器（燒杯或三角燒瓶等）預(yù)先經(jīng)過(guò)高壓濕熱滅菌，以減少污染雜菌對(duì)檢測(cè)過(guò)程的干擾。還有TTB配制所需的碘液一定要避光保存。
三、檢測(cè)過(guò)程方面
1、前增菌和二次增菌不可少
前增菌是為了使受傷菌得到修復(fù)。另外食品中的沙門氏菌含量一般都很少，而且會(huì)有多種細(xì)菌同時(shí)存在的情況。所以用前增菌和增菌分別進(jìn)行篩選和培養(yǎng)，以便增加后期的分離培養(yǎng)的檢出率。
2、要防止干擾及誤判，盡可能多地挑取可疑菌
一般實(shí)驗(yàn)室都會(huì)挑取選擇性培養(yǎng)基上典型的沙門氏菌特征菌落如黑色中央的菌落做后續(xù)鑒定，而未選取非典型菌落。通常的沙門氏菌在HE瓊脂（HE）或木糖賴氨酸瓊脂(XLD)上不發(fā)酵乳糖（不產(chǎn)生黃色菌落），而亞利桑那沙門氏菌具有緩慢發(fā)酵乳糖的特性，如實(shí)驗(yàn)人員缺乏足夠經(jīng)驗(yàn)，可能忽略黃色菌落，導(dǎo)致漏檢。
還有，如果檢品中的污染菌比較復(fù)雜，也要盡量多挑取可疑菌進(jìn)行生化鑒定以及血清學(xué)鑒定。如弗氏枸櫞酸桿菌可在24h 時(shí)形成具有沙門氏菌典型特征的菌落，生化反應(yīng)與沙門氏菌相似，并且與沙門氏菌診斷血清有輕微的交叉反應(yīng)，可能導(dǎo)致出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；粘質(zhì)沙雷氏菌在科瑪嘉沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上的顏色與典型的沙門氏菌的紫紅色很接近。
實(shí)驗(yàn)人員切記不可只看選擇性培養(yǎng)基上的特征和TSI 特征符合就報(bào)結(jié)果，沒(méi)有把關(guān)鍵的生化反應(yīng)（如賴氨酸脫羧酶和血清型試驗(yàn)A-F-O 多價(jià)）完成。這些都可能導(dǎo)致假陽(yáng)性的結(jié)果。
3、TSI接種注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)的時(shí)候需要先劃線再穿刺，如果先穿刺再劃線，由于菌含量太高，如果產(chǎn)H2S變黑，底層產(chǎn)酸現(xiàn)象的觀察會(huì)受影響，還有就是，如果產(chǎn)氣比較多的話，培養(yǎng)基會(huì)被頂出老高，嚴(yán)重的話還有可能會(huì)頂開試管塞。
4、血清學(xué)鑒定注意事項(xiàng)
血清學(xué)鑒定的時(shí)候一定要用生理鹽水做對(duì)照，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。
四、結(jié)果判定方面
實(shí)驗(yàn)人員一定要綜合生化試驗(yàn)以及血清學(xué)鑒定的結(jié)果才能最終判定檢出還是未檢出沙門氏菌。
