產(chǎn)品名稱：NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit
中文名稱：NGS第二鏈cDNA合成試劑盒
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 （點(diǎn)擊名稱進(jìn)入下單頁面） | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKN422系列 | NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit | 20次 | 100次 | crispr基因編輯（合成雙鏈cDNA試劑盒） | — |
| HKN422A | NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit | 20次 | 2220 | |
| HKN422B | NGS第二鏈cDNA合成試劑盒 | 100次 | 9958 |
產(chǎn)品描述：NGS Second-Strand cDNA Synthesis kit 是一種在合成了 cDNA 第一鏈的基礎(chǔ)上去除 RNA-DNA 雜合鏈中的 RNA 鏈，并合成 cDNA 第二鏈，最終形成雙鏈 cDNA 的試劑盒。主要用于二代測(cè) 序（NGS）文庫構(gòu)建中 cDNA 第二鏈的合成。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1) 本試劑盒包含了進(jìn)行 cDNA 第二鏈合成所需的各種試劑， 簡(jiǎn)便，高效；
2) 合成的雙鏈 cDNA，可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、 cDNA 文庫的構(gòu)建等。
應(yīng)用實(shí)例：
1、cDNA 第二鏈合成
模板：采用體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板逆轉(zhuǎn)錄得到 810bp cDNA
M：DL2000；
泳道 1：逆轉(zhuǎn)錄得到 cDNA 第一鏈；
泳道 2：protein cDNA 第二鏈合成試劑盒得到 cDNA 第二鏈；
泳道 3：A 公司 cDNA 第二鏈合成試劑盒得到 cDNA 第二鏈；
2、cDNA 第二鏈合成產(chǎn)物酶切驗(yàn)證
DNase I 能消化 DNA-RNA 雜合鏈中的 DNA 和 dsDNA，而 RNase H 消化 DNA-RNA 雜合鏈中的 RNA，不消化 dsRNA。
M：DL2000；
泳道 1：cDNA 第一鏈；
泳道 2：cDNA 第一鏈+DNase I；
泳道 3：cDNA 第一鏈+RNaseH；
泳道 4：cDNA 第二鏈；
泳道 5：cDNA 第二鏈+DNase I；
泳道 6：cDNA 第二鏈+ RNaseH；
NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit 產(chǎn)品包裝：
| 產(chǎn)品組成 | A包裝 | B包裝 |
| NGS Second-Strand DNA Synthesis Enzyme Mix | 100μl | 500μl |
| NGS Second-Strand cDNA Synthesis Reaction Buffer | 500μl | 1ml×3 |
| RNase Free Water | 1ml×2 | 1ml×6 |
操作方法：
1，在冰上向已完成的 cDNA 第一鏈 20μl 反應(yīng)體 系中依次加入如下試劑：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| First-Strand Synthesis product | 20ul |
| Second-Strand cDNA Synthesis Enzyme Mix | 5μl |
| Second-Strand cDNA Synthesis Reaction Buffer | 20μl |
| RNase free water | 55ul |
2，按上述體系輕輕混勻，隨后離心沉淀液體。
3，16℃孵育 2 小時(shí)，熱蓋溫度不超過 40℃。
4，75℃ 熱 失 活 20min ； 或 加 入 5μl 0.5M EDTA(pH8.0)終止反應(yīng)。
5，后續(xù)使用磁珠純化、酚氯仿抽提、乙醇沉淀 等方法純化合成的雙鏈 cDNA，也可以使用 適應(yīng)的 DNA 純化試劑盒進(jìn)行純化。
