產(chǎn)品名稱：Cas12a Nuclease(2.5μg/μl)
中文名稱：Cas12a 核酸酶
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKE373-YH01-01A | Cas12a Nuclease(2.5μg/μl) | 50μg/盒(2.5μg/μl) | crispr基因編輯（核酸酶） | 1365 |
產(chǎn)品描述：
CRISPR/Cas 是細(xì)菌和古細(xì)菌在長期演化過程中形成的一 種適應(yīng)性免疫防御系統(tǒng)。CRISPR 相關(guān)蛋白 Cas9 已經(jīng)廣泛應(yīng)用 于基因組編輯，相比于 Cas9 蛋白，Cas12a 具有類似的基因組編 輯效率，但具有較低的脫靶效率，在基因治療應(yīng)用中具有巨大 的 潛力。
不同于 Cas9 蛋白，Cas12a 不需要 tracrRNA，只需要單個(gè)由 41-44nt 核苷酸組成的 crRNA 引導(dǎo)。這非常有利于基因組編輯，因 為 Cas12a 不僅比 Cas9 小，而且還具有較小的 crRNA 分子（接 近 Cas9 的總 sgRNA 的一半）。與 Cas9 需要富含 G 的 PAM 相 反， Cas12a-crRNA 復(fù)合物通過識別富含 T（5'-TTTN-3'）的 PAM 基 序來切割靶 DNA。Cas12a 執(zhí)行剪切后的 DNA 雙鏈斷裂 引入了 4 或 5 個(gè)核苷酸突出的粘性末端。這促使 Cas12a 可以作 為一種新 型的基因檢測和成像的工具。
本制品在蛋白兩端分別加了核定位信號（NLS），當(dāng) Cas12a 以 NLS 序列表達(dá)時(shí)，Cas12a-RNP 復(fù)合體可以在進(jìn)入細(xì)胞后立即 定位到細(xì)胞核。無需體內(nèi)轉(zhuǎn)錄或翻譯，提高了該方法在質(zhì)粒系 統(tǒng)上的效率。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1) 純蛋白體系，避免 CRISPR 基因敲除時(shí)引入質(zhì)粒或病毒干擾；
2) 可顯著降低脫靶效應(yīng)。
產(chǎn)品用途：
1，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲除；
2，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲入；
3，sgRNA 剪切靶點(diǎn) DNA 效率檢測，降低體內(nèi)篩選成本；
4，體外剪切靶 DNA 的特異位點(diǎn)。
應(yīng)用實(shí)例：圖例）Cas12a Nuclease 做 DNA 片段體外切割活性檢測：
帶有靶位點(diǎn)的 DNA 片段約為 2000bp，酶切后的片段為 1600bp 和 400bp。
保存溫度：-20℃保存，或-80℃長期保存。
Cas12a Nuclease(2.5μg/μl) 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| Cas12a Nuclease (2.5μg/μl) | 20 μL |
| 10× Cas12a Reaction Buffer | 1ml |
質(zhì)量保證：經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE 膠檢測僅可見清晰單一的 目的條帶，純度達(dá) 95%；內(nèi)毒素含量< 100EU/mg；qPCR 方法檢測無大腸桿菌基因組殘留；無 RNase、核酸內(nèi)、外 切酶污染。
體外切割體系（20μL）：
| dsDNA | 200 ng |
| sgRNA | 200 ng |
| Cas12a Nuclease | 0.5-1.5 μg |
| 10× Cas12a Reaction Buffer | 2 μl |
| RNase Free Water | To 20 μl |
37 ℃保溫 1 h、70℃保溫 10 min
注：在反應(yīng)體系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl，防止 dsDNA 不 純 導(dǎo)致 sgRNA 的降解。
相關(guān)產(chǎn)品：
| HKE365 | Cas9 Nuclease |
| HKE366* | Cas9 D10A Nickase |
| HKE367** | Cas9 H840A Nickase |
| HKE368*** | Cas9(D10A,H840A) Nuclease |
| HKE379 | NLS-Cas9-EGFP Nuclease |
| HKE369 | sgRNA In Vitro one-step Transcription Kit |
| HKE370 | sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit |
* 為 Cas9(D10A) Nickase，能在與 sgRNA 靶序列互補(bǔ)的 DNA 鏈上 產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可減少意外的脫靶基因修飾。
** 為 Cas9(H840A) Nickase，能在 sgRNA 靶序列所在的 DNA 鏈上 產(chǎn) 生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可減少意外的脫靶基因修飾。
***為 Cas9 D10A,H840A 雙突變失活酶，具有靶 DNA 結(jié)合活性，但 無 切割活性，可用于陰性對照等用途。
