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產(chǎn)品名稱：Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell
中文名稱：Rosetta(DE3)plysS 感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKV212-01A | Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell | 100μl×10支 | 感受態(tài)細(xì)胞 | 386 |
產(chǎn)品描述：Rosetta 菌株是攜帶氯霉素抗性質(zhì)粒 BL21 的衍生菌，補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的 6 種稀有密碼子（AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA）對(duì)應(yīng)的 tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。本產(chǎn)品是經(jīng)特殊工藝制作得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
適用于T7 RNA 聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿主，T7 噬菌體 RNA 聚合酶基因的表達(dá)受控于 λ 噬菌體 DE3 區(qū) 的 lacUV5 啟動(dòng)子，該區(qū)整合于 BL21 的染色體上。
適用于非毒性蛋白的表達(dá)。
基因型：
轉(zhuǎn)化效率：使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 10? cfu/μg。
保存溫度：-70℃
Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell | 100μl×10 |
| Control DNA pUC19（1ng/μl） | 10μl |
操作方法：
1）取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的用量為 50-100μl，可根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。所用 DNA 的體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞的十分之一，以下實(shí)驗(yàn)以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2）待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（通常 100μl 感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用移液槍吹打混合，冰上放置 30 分鐘。
3）將離心管置于 42℃水浴中，熱擊 60-90 秒，迅速將離心管置于冰上，放置 2-3 分鐘。
4）向每個(gè)離心管中加入 500μl 無(wú)菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培養(yǎng)基中，37℃搖床，150rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘，使質(zhì)粒上相關(guān)抗性基因表達(dá)，菌體復(fù)蘇。
5）吸取 200μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的 LB 或 SOC 固體平板上，用無(wú)菌涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于 37℃培養(yǎng)箱里直至液體完全吸收，倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。涂布量應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整，如果轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板，如果預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少，可 3000rpm 離心 5 分鐘，吸取部分培養(yǎng)基，懸浮菌體后涂布在一個(gè)平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰箱中保存，如果第二日轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩余菌液再涂布在新的平板上。
注意事項(xiàng)：
1）感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存于-70℃冰箱中，不可反復(fù)凍融，或放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，避免感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率降低。
2）實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，應(yīng)注意無(wú)菌條件。
3）實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，可保留部分連接反應(yīng)液，當(dāng)轉(zhuǎn)化不成功時(shí)，可重新轉(zhuǎn)化。
