產(chǎn)品名稱：細(xì)菌基因組 DNA 純化試劑盒（硅膠膜柱法）
英文名稱：Bacterial DNA purification kit（Silica membrane）
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
| TQ001D0 | 細(xì)菌基因組 DNA 純化試劑盒（硅膠膜柱法） | 50 份/盒 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：用于細(xì)菌基因組 DNA 的小量提取，其原理是利用細(xì)胞裂解釋放基因組 DNA；隨后利用蛋白酶 K 降解膜蛋白和纏繞 DNA 的核蛋白，使 DNA 充分游離；硅膠膜離心過(guò)濾可逆吸附基因組 DNA；洗除蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)后，用洗脫液洗脫獲得高純度基因組DNA。使用本試劑盒提取的 DNA 可用于各種常規(guī)分子實(shí)驗(yàn)操作，包括酶切、PCR、分子雜交等實(shí)驗(yàn)。
儲(chǔ)存條件及有效期：室溫保存，有效期一年，2~8℃條件下儲(chǔ)存更佳，儲(chǔ)存過(guò)程中若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前將其在室溫放置一段時(shí)間或 37℃條件下溫育，待充分溶解后搖勻即可使用。
樣本類型：新鮮細(xì)菌培養(yǎng)液或菌落懸浮液。
試劑盒組成：
| 序號(hào) | 產(chǎn)品組成 | 規(guī)格 |
| 1 | 懸浮液 | 15 mL |
| 2 | 裂解液 | 15 mL |
| 3 | 去蛋白緩沖液 | 24 mL（使用前加 16 mL 無(wú)水乙醇） |
| 4 | 漂洗液 | 15 mL（使用前加 60 mL 無(wú)水乙醇） |
| 5 | 洗脫液 | 10 mL |
| 6 | DNA 硅膠膜吸附柱 | 50 套 |
| 7 | 使用說(shuō)明書(shū) | 1 份 |
選配試劑：蛋白酶 K、溶菌酶。
提取得率：1 mL 純培養(yǎng)菌液對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌液（106~108cells）基因組DNA 的提取量分別為：革蘭氏陰性菌 6~25 μg，革蘭氏陽(yáng)性菌為6~15 μg；OD260/280=1.7~1.9。
細(xì)菌基因組 DNA 純化試劑盒（硅膠膜柱法）使用方法：
● 初次使用前請(qǐng)?jiān)谌サ鞍拙彌_液和漂洗液中加入無(wú)水乙醇，參見(jiàn)瓶身標(biāo)簽或使用說(shuō)明書(shū)。
1， 吸取 1~2 mL 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)菌培養(yǎng)液于 1.5 mL 離心管中。12,000 r/min 離心 1 min，盡量吸除上清。
2， 對(duì)革蘭氏陰性菌，向離心得到的菌體沉淀中加入200 μL懸浮液，渦旋振蕩至充分懸浮。
3， 對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌，需加入溶菌酶輔助破壁處理。具體方法為：向步驟1中收集的菌體沉淀加入120 μL懸浮液，充分懸浮后加入 80 μL 的溶菌酶，37℃水浴 30 min。
● 如目標(biāo)菌未知革蘭氏屬性，按照革蘭氏陽(yáng)性菌提取流程處理。
● 如需要去除 RNA，可加入 4 μL RNase A （100 mg/mL）溶液，震蕩混勻后，室溫放置 5 min。
4， 加入 20 μL 蛋白酶 K，55℃水浴 30 min。
5， 加入 220 μL 裂解液，渦旋振蕩混勻，65℃水浴或金屬浴 10 min，溶液形成清亮的懸浮液。
● 裂解液加入后會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般水浴或金屬浴后會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)提取。如溶液未變清亮，說(shuō)明細(xì)菌裂解不徹底，可能導(dǎo)致 DNA 提取量減少或不純。如提取菌體超過(guò) 1.5 mL，可適當(dāng)延長(zhǎng)溫育時(shí)間。
6， 加入 220 μL 無(wú)水乙醇，振蕩混勻，此時(shí)可能出現(xiàn)白色絮狀沉淀，簡(jiǎn)短離心將內(nèi)壁的液體離心到管底。
7， 將所得的溶液和絮狀沉淀全部加入 DNA 硅膠膜吸附柱上（吸附柱套入收集管中），12,000 r/min 離心 1 min，倒掉濾液，吸附柱套回收集管。
● 溶液中基因組 DNA 吸附在硅膠膜上，如發(fā)生堵塞，說(shuō)明提取的菌體過(guò)量，應(yīng)適當(dāng)減少菌量或延長(zhǎng)離心時(shí)間，直到所有的溶液順利離心到收集管中為止。
8， 加入 500 μL 去蛋白緩沖液，12,000 r/min 離心 1 min，倒掉濾液，吸附柱套回收集管。
? 去蛋白緩沖液初次使用前加入 16 mL 無(wú)水乙醇。
9，加入 500 μL 漂洗液，12,000 r/min 離心 1 min，倒掉濾液，吸附柱套回收集管。
? 漂洗液初次使用前加入 60 mL 無(wú)水乙醇。
10，再次加入 500 μL 漂洗液，12,000 r/min 離心 1 min，倒掉濾液，吸附柱套回收集管，再次 12,000 r/min 離心 1 min，徹底去除吸附柱中殘留的液體，室溫放置 2 min，去除殘留的乙醇。
11，將吸附柱套入新的 1.5 mL 無(wú)菌的離心管中，向吸附柱中央處懸空滴加 50~100 μL 洗脫液，室溫靜置 5 min，12,000 r/min 離心 2 min，離心得到的液體轉(zhuǎn)移到無(wú)菌的EP 管中，-20℃保存待用。
● 洗脫液可用無(wú)菌去離子水替代，但 pH 值應(yīng)在 8.0~8.5。
● 將洗脫液預(yù)熱到 60℃使用，可提高基因組 DNA 得率。
● 為提高基因組 DNA 提取得率，可將洗脫得到的溶液再次吸出滴加到吸附柱中央，靜置幾分鐘后再次離心收集。
