15 版與10版《中國藥典》中制藥微生物無菌檢查對比
發(fā)布時間：2019-11-21 瀏覽次數(shù)：5515
2015年版《中國藥典》在微生物檢驗方法上做了很多更新，今天就簡單講下新版藥典無菌檢查有哪些改動。
1、 微生物檢測環(huán)境
對于微生物檢測環(huán)境的要求，原10版藥典是在10000級下的局部100級的單向流空氣區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進行。而15版藥典在“1101無菌檢查法”中則寫道，無菌檢查應在無菌條件下進行，實驗環(huán)境必須達到無菌檢查的要求，檢驗全過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。突然看到這的，大家可能會感到疑惑，這不就是沒有要求了嗎？
相對于10版的要求，這反而是降低了檢測環(huán)境的要求。其實，并不是如此，“9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則”中，則是寫出了無菌檢查應在B級背景下的A級單向流潔凈區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進行。檢測環(huán)境并沒有降低標準，只是變成了推薦，變換了位置，因此對于藥典的解讀和學習真的需要我們靜下心來，認真的去學習。
2、 微生物培養(yǎng)基
其次對培養(yǎng)基要求 。在微生物檢驗中，培養(yǎng)基是實驗的重要組成部分。檢驗的合理性和真實性，主要是通過培養(yǎng)基來實現(xiàn)的。10版藥典檢驗用的是改良馬丁培養(yǎng)基和硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，而15版藥典則是改用了胰酪大豆胨液體培養(yǎng)和硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。
不知道大家在藥典升級的時候有沒有做過培養(yǎng)基的促生長能力的對比，當時我們有簡單做過，就生長時間而言，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基比改良馬丁的增長時間要短些，簡而言之就是前者的生長狀況會更好些。同時，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在培養(yǎng)某些芽孢桿菌的能力上有局限性，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基則可以作為很好的補充。如何確定培養(yǎng)基是否質量合格，或者怎樣才能用于無菌檢驗，這就要看培養(yǎng)基促生長實驗或者說靈敏度測試了。當然對于無菌檢測的培養(yǎng)基還需要進行培養(yǎng)基的無菌性實驗。
原10版藥典中靈敏度實驗是這樣描述：
“取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種小于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2 支， 另1支不接種，作為空白對照，置30~35℃培養(yǎng)3天；取每管裝量為9m的改良馬丁培養(yǎng)基5支，分別接種小于100CFU的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種，作為空白對照，置20~25℃培養(yǎng)5天。逐日觀察結果?！?/p>
15版藥典則變的更加平衡：
“取每管裝量為12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7 支，分別接種小于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2 支，另1 支不接種作為空白對照，培養(yǎng)3 天；取每管裝量為9ml 的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支,分別接種小于100CFU的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)5天。逐日觀察結果?！?/p>
從說明上可以看出，15版藥典更加接近美國藥典和歐洲藥典。從促生長能力上來說，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基在促進芽孢桿菌的生長能力上優(yōu)于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，無菌檢查使用前者進行芽孢桿菌的檢測，因此需要用芽孢桿菌考察其促生長能力。不僅培養(yǎng)基靈敏度實驗10版藥典和15版藥典有所不同，而且培養(yǎng)基的無菌性實驗也是有所不同。10版要求“每批培養(yǎng)基隨機抽取不少于10支（瓶），5支（瓶）置3 0 ~ 3 5 ℃、另5支（瓶）置2 0 ~ 2 5 ℃培養(yǎng)14天，均應無菌生長?！?/p>
而15版則要求，“每批培養(yǎng)基隨機取不少于5支（瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14 天，應無菌生長。”15版藥典取消了兩個溫度培養(yǎng)的要求，完全根據(jù)相應的培養(yǎng)時間去進行無菌性培養(yǎng)。這樣得出的結果更加合理，且滿足檢驗環(huán)境，畢竟我們不是進行模擬灌裝，兩個溫度確實是有點不合理。當然這是個人觀點，如有其他的觀點歡迎探討。
3、 方法適用性實驗
在方法適用性實驗中。10版藥典，方法適用性的菌種和培養(yǎng)基靈敏度所使用的是一樣的。而15版藥典中則將靈敏度實驗中的銅綠假單胞菌變成了大腸桿菌，這是因為大腸埃希菌對于一些抗革蘭氏陰性菌的抗生素更加敏感，所以在做無菌方法性實驗的時候這點要十分注意。
藥典改版后，大家也多數(shù)選擇薄膜過濾法進行無菌實驗，因此大家也會注意到一點，緩沖液沖洗量不要超過1000mL，對于這個地方，大家會帶來些許疑惑，因為有的時候可能樣品就超過了這個量，那我們的是要該怎么做呢？其實大家應該仔細看看藥典要求，他說的是緩沖液沖洗量，并沒有說和樣品加在一起。當然對于要進行歐盟和FDA 審計注冊的時候還要注意一點，對于膜的沖洗歐洲藥典和美國藥典要求不大于500mL。
然后是日常檢驗，依據(jù)方法適用性的檢測方法進行測試。但值得注意的地方是，中國藥典要進行陽性實驗，而歐美藥典則在日常檢驗中沒有要求進行陽性實驗。也要注意，陽性實驗中中國藥典要根據(jù)產品特性進行菌種的添加，所以大家對于陽性實驗要有合理的評估，然后再進行菌種的添加。
總結：在做無菌檢驗過程中，實際問題我們需要根據(jù)實際情況去分析。在面臨問題時候，不要急，也不要慌，合理的去思考問題，解決問題，這樣才有利于我們優(yōu)化過程。
文章轉載自微生物研究院，僅為技術交流。
