15 版與10版《中國藥典》中制藥微生物無菌檢查對比
發(fā)布時(shí)間：2019-11-21 瀏覽次數(shù)：5619
2015年版《中國藥典》在微生物檢驗(yàn)方法上做了很多更新，今天就簡單講下新版藥典無菌檢查有哪些改動。
1、 微生物檢測環(huán)境
對于微生物檢測環(huán)境的要求，原10版藥典是在10000級下的局部100級的單向流空氣區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。而15版藥典在“1101無菌檢查法”中則寫道，無菌檢查應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無菌檢查的要求，檢驗(yàn)全過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。突然看到這的，大家可能會感到疑惑，這不就是沒有要求了嗎？
相對于10版的要求，這反而是降低了檢測環(huán)境的要求。其實(shí)，并不是如此，“9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”中，則是寫出了無菌檢查應(yīng)在B級背景下的A級單向流潔凈區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。檢測環(huán)境并沒有降低標(biāo)準(zhǔn)，只是變成了推薦，變換了位置，因此對于藥典的解讀和學(xué)習(xí)真的需要我們靜下心來，認(rèn)真的去學(xué)習(xí)。
2、 微生物培養(yǎng)基
其次對培養(yǎng)基要求 。在微生物檢驗(yàn)中，培養(yǎng)基是實(shí)驗(yàn)的重要組成部分。檢驗(yàn)的合理性和真實(shí)性，主要是通過培養(yǎng)基來實(shí)現(xiàn)的。10版藥典檢驗(yàn)用的是改良馬丁培養(yǎng)基和硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，而15版藥典則是改用了胰酪大豆胨液體培養(yǎng)和硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。
不知道大家在藥典升級的時(shí)候有沒有做過培養(yǎng)基的促生長能力的對比，當(dāng)時(shí)我們有簡單做過，就生長時(shí)間而言，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基比改良馬丁的增長時(shí)間要短些，簡而言之就是前者的生長狀況會更好些。同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在培養(yǎng)某些芽孢桿菌的能力上有局限性，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基則可以作為很好的補(bǔ)充。如何確定培養(yǎng)基是否質(zhì)量合格，或者怎樣才能用于無菌檢驗(yàn)，這就要看培養(yǎng)基促生長實(shí)驗(yàn)或者說靈敏度測試了。當(dāng)然對于無菌檢測的培養(yǎng)基還需要進(jìn)行培養(yǎng)基的無菌性實(shí)驗(yàn)。
原10版藥典中靈敏度實(shí)驗(yàn)是這樣描述：
“取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種小于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2 支， 另1支不接種，作為空白對照，置30~35℃培養(yǎng)3天；取每管裝量為9m的改良馬丁培養(yǎng)基5支，分別接種小于100CFU的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種，作為空白對照，置20~25℃培養(yǎng)5天。逐日觀察結(jié)果?！?/p>
15版藥典則變的更加平衡：
“取每管裝量為12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7 支，分別接種小于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2 支，另1 支不接種作為空白對照，培養(yǎng)3 天；取每管裝量為9ml 的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支,分別接種小于100CFU的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)5天。逐日觀察結(jié)果。”
從說明上可以看出，15版藥典更加接近美國藥典和歐洲藥典。從促生長能力上來說，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基在促進(jìn)芽孢桿菌的生長能力上優(yōu)于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，無菌檢查使用前者進(jìn)行芽孢桿菌的檢測，因此需要用芽孢桿菌考察其促生長能力。不僅培養(yǎng)基靈敏度實(shí)驗(yàn)10版藥典和15版藥典有所不同，而且培養(yǎng)基的無菌性實(shí)驗(yàn)也是有所不同。10版要求“每批培養(yǎng)基隨機(jī)抽取不少于10支（瓶），5支（瓶）置3 0 ~ 3 5 ℃、另5支（瓶）置2 0 ~ 2 5 ℃培養(yǎng)14天，均應(yīng)無菌生長?！?/p>
而15版則要求，“每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支（瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14 天，應(yīng)無菌生長。”15版藥典取消了兩個(gè)溫度培養(yǎng)的要求，完全根據(jù)相應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間去進(jìn)行無菌性培養(yǎng)。這樣得出的結(jié)果更加合理，且滿足檢驗(yàn)環(huán)境，畢竟我們不是進(jìn)行模擬灌裝，兩個(gè)溫度確實(shí)是有點(diǎn)不合理。當(dāng)然這是個(gè)人觀點(diǎn)，如有其他的觀點(diǎn)歡迎探討。
3、 方法適用性實(shí)驗(yàn)
在方法適用性實(shí)驗(yàn)中。10版藥典，方法適用性的菌種和培養(yǎng)基靈敏度所使用的是一樣的。而15版藥典中則將靈敏度實(shí)驗(yàn)中的銅綠假單胞菌變成了大腸桿菌，這是因?yàn)榇竽c埃希菌對于一些抗革蘭氏陰性菌的抗生素更加敏感，所以在做無菌方法性實(shí)驗(yàn)的時(shí)候這點(diǎn)要十分注意。
藥典改版后，大家也多數(shù)選擇薄膜過濾法進(jìn)行無菌實(shí)驗(yàn)，因此大家也會注意到一點(diǎn)，緩沖液沖洗量不要超過1000mL，對于這個(gè)地方，大家會帶來些許疑惑，因?yàn)橛械臅r(shí)候可能樣品就超過了這個(gè)量，那我們的是要該怎么做呢？其實(shí)大家應(yīng)該仔細(xì)看看藥典要求，他說的是緩沖液沖洗量，并沒有說和樣品加在一起。當(dāng)然對于要進(jìn)行歐盟和FDA 審計(jì)注冊的時(shí)候還要注意一點(diǎn)，對于膜的沖洗歐洲藥典和美國藥典要求不大于500mL。
然后是日常檢驗(yàn)，依據(jù)方法適用性的檢測方法進(jìn)行測試。但值得注意的地方是，中國藥典要進(jìn)行陽性實(shí)驗(yàn)，而歐美藥典則在日常檢驗(yàn)中沒有要求進(jìn)行陽性實(shí)驗(yàn)。也要注意，陽性實(shí)驗(yàn)中中國藥典要根據(jù)產(chǎn)品特性進(jìn)行菌種的添加，所以大家對于陽性實(shí)驗(yàn)要有合理的評估，然后再進(jìn)行菌種的添加。
總結(jié)：在做無菌檢驗(yàn)過程中，實(shí)際問題我們需要根據(jù)實(shí)際情況去分析。在面臨問題時(shí)候，不要急，也不要慌，合理的去思考問題，解決問題，這樣才有利于我們優(yōu)化過程。
文章轉(zhuǎn)載自微生物研究院，僅為技術(shù)交流。
