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商品化脫水合成培養(yǎng)基配制使用注意事項

發(fā)布時間:2019-10-18    瀏覽次數(shù):5182

1. 一般要求

正確制備培養(yǎng)基是微生物檢驗的最基礎步驟之一,使用脫水培養(yǎng)基和其他成分,尤其是含有有毒物質(zhì)(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時,應遵守良好實驗室規(guī)范和生產(chǎn)廠商提供的使用說明。培養(yǎng)基的不正確制備會導致培養(yǎng)基出現(xiàn)質(zhì)量問題,如含瓊脂培養(yǎng)基不凝固、ph不在要求范圍、滅菌后顏色變深等。

使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時,應嚴格按照廠商提供的使用說明配制。如重量(體積)、pH、制備日期、滅菌條件和操作步驟等。 實驗室使用各種基礎成分制備培養(yǎng)基時,應按照配方準確配制,并記錄相關(guān)信息,如:培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質(zhì)含量、制造商、批號、pH、培養(yǎng)基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等,以便溯源。

2. 水

實驗用水的電導率在25℃時不應超過25 μS/cm(相當于電阻率≥0.4 ΜΩcm),除非另有規(guī)定要求。 水的微生物污染不應超過103 CFU/mL。應按GB 4789.2,采用平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基,在36 ℃±1 ℃培養(yǎng)48 h±2 h進行定期檢查微生物污染。

3.培養(yǎng)基稱重和溶解

小心稱量所需量的脫水合成培養(yǎng)基(必要時佩戴口罩或在通風柜中操作,以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末),先加入適量的水,充分混合(注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊),然后加水至所需的量后適當加熱,并重復或連續(xù)攪拌使其快速分散,必要時應完全溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應浸泡幾分鐘。

4. 培養(yǎng)基pH 的測定和調(diào)整

用pH計測pH,必要時在滅菌前進行調(diào)整,除特殊說明外,培養(yǎng)基滅菌后冷卻至25 ℃時,pH應在標準pH±0.2范圍內(nèi)。一般使用濃度約為40 g/L(約1 mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5 g/L(約1 mol/L)的鹽酸溶液調(diào)整培養(yǎng)基的pH。如需滅菌后進行調(diào)整,則使用滅菌或除菌的溶液。

5. 培養(yǎng)基分裝

將配好的培養(yǎng)基分裝到適當?shù)娜萜髦校萜鞯捏w積應比培養(yǎng)基體積最少大20%。

6. 培養(yǎng)基滅菌

培養(yǎng)基應采用濕熱滅菌法或過濾除菌法。某些培養(yǎng)基不能或不需要高壓滅菌,可采用煮沸滅菌,如SC肉湯等特定的培養(yǎng)基中含有對光和熱敏感的物質(zhì),煮沸后應迅速冷卻,避光保存;有些試劑則不需滅菌,可直接使用。

濕熱滅菌在高壓鍋或培養(yǎng)基制備器中進行,高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15min,具體培養(yǎng)基按食品微生物學檢驗標準中的規(guī)定進行滅菌。培養(yǎng)基體積不應超過1000mL,否則滅菌時可能會造成過度加熱。所有的操作應按照標準或使用說明的規(guī)定進行。滅菌效果的控制是關(guān)鍵問題。加熱后采用適當?shù)姆绞嚼鋮s,以防加熱過度。這對于大容量和敏感培養(yǎng)基十分重要,例如含有煌綠的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基十分重要,例如含有煌綠的培養(yǎng)基。

過濾除菌可在真空或加壓的條件下進行。使用孔徑為0.2 μm的無菌設備和濾膜。消毒過濾設備的 各個部分或使用預先消毒的設備。一些濾膜上附著有蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)(如抗生素),為了達到有效過濾,應事先將濾膜用無菌水潤濕。

檢查 對經(jīng)濕熱滅菌或過濾除菌的培養(yǎng)基進行檢查,尤其要對pH、色澤、滅菌效果和均勻度等指標進行檢查。

7. 培養(yǎng)基的使用

7.1 瓊脂培養(yǎng)基的融化

將瓊脂培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法(如高壓鍋中的層流蒸汽)使之融化。經(jīng)過高壓的瓊脂培養(yǎng)基應盡量減少重新加熱時間,融化后避免過度加熱。融化后應短暫置于室溫中(如2 min)以避免玻璃瓶破碎。

融化后的培養(yǎng)基放入47℃~50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫(可根據(jù)實際培養(yǎng)基凝固溫度適當提高水浴鍋溫度),直至使用,培養(yǎng)基達到47℃~50℃的時間與培養(yǎng)基的品種、體積、數(shù)量有關(guān)。融化后的培養(yǎng)基應盡快使用,放置時間一般不應超過4 h。未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培養(yǎng)基尤應注意,融化后保溫時間應盡量縮短,如有特定要求可參考指定的標準。傾注到樣品中的瓊脂培養(yǎng)基溫度應控制在約45℃左右。

7.2 培養(yǎng)基的脫氧

必要時,將培養(yǎng)基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15 min;加熱時松開容器的蓋子;加熱后蓋緊,并迅速冷卻至使用溫度(如FT培養(yǎng)基)。

7.3 添加成分的加入

對熱不穩(wěn)定的添加成分應在培養(yǎng)基冷卻至47℃~50℃時再加入。無菌的添加成分在加入前應先放置到室溫,避免冷的液體造成瓊脂凝結(jié)或形成片狀物。將加入添加成分的培養(yǎng)基緩慢充分混勻,盡快分裝到待用的容器中。

7.4 平板的制備和儲存

傾注融化的培養(yǎng)基到平皿中,使之在平皿中形成厚度至少為3 mm(直徑90mm的平皿,通常要加入18mL~20mL瓊脂培養(yǎng)基)。將平皿蓋好皿蓋后放到水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板需儲存,或者培養(yǎng)時間超過48h或培養(yǎng)溫度高于40℃,則需要傾注更多的培養(yǎng)基。凝固后的培養(yǎng)基應立即使用或存放于暗處和(或)5℃±3℃冰箱的密封袋中,以防止培養(yǎng)基成分的改變。在平板底部或側(cè)邊做好標記,標記的內(nèi)容包括名稱、制備日期和(或)有效期。也可使用適宜的培養(yǎng)基編碼系統(tǒng)進行標記。

將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產(chǎn)生,平板應冷卻后再裝入袋中。儲存前不要對培養(yǎng)基表面進行干燥處理。對于采用表面接種形式培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基,應先對瓊脂表面進行干燥:揭開平皿蓋,將平板倒扣于烘箱或培養(yǎng)箱中(溫度設為25℃~50℃);或放在有對流的無菌凈化臺中,直到培養(yǎng)基表面的水滴消失為止。注意不要過度干燥。商品化的平板瓊脂培養(yǎng)基應按照廠商提供的說明使用。

8. 培養(yǎng)基的棄置

所有污染和未使用的培養(yǎng)基的棄置應采用安全的方式,并且要符合相關(guān)法律法規(guī)的規(guī)定。

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