產(chǎn)品名稱:糞鏈球菌核酸快速檢測試劑盒
英文名稱:Rapid Detection kit for Streptococcus faecalis
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格:
編號 | 規(guī)格 |
KJD02L | 24 測試/盒 |
產(chǎn)品簡介:本試劑盒基于環(huán)介導的恒溫擴增技術(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),用于包裝飲用水等水體中糞鏈球菌的快速檢測,并借助顯色指示劑直接判讀結果。
檢測原理:利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶,使模板兩端引物結合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結構,引物順利與模板結合并進行鏈置換擴增反應,實現(xiàn)在恒溫條件下(60-65℃)進行連續(xù)快速擴增。反應加入顯色指示劑,陰陽性結果顯色差異顯著,可直接通過顏色變化判讀結果。
產(chǎn)品特點:
1. 快速簡便:將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理,增加試劑穩(wěn)定性,使用時減少溶液配制步驟,更為便捷,整個檢測反應可在1 h內(nèi)完成;
2. 特異性高:利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設計多條引物,保證擴增反應的高度特異性;
3. 靈敏度高:最低檢驗限達到9 CFU/Test;
4. 判讀簡單:反應前加入顯色指示劑,反應后通過肉眼觀察反應液顏色變化或者經(jīng)熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結果,直觀方便,且可有效避免反應后開蓋造成的氣溶膠污染。
糞鏈球菌核酸快速檢測試劑盒產(chǎn)品組分:
組分編號 | 組分名稱 | 規(guī)格數(shù)量 |
DRL02 | 檢測試劑(凍干) | 3排 × 8管 |
FRL01 | 復溶液 | 650μL × 1管 |
PRL02 | 陽性對照(凍干) | 1管 |
SHR01 | 陰性對照(凍干) | 1管 |
SHR02 | 裂解液 | 1mL × 1管 |
SHR03 | 顯色指示劑 | 80μL× 1管 |
SHR04 | 超純水 | 1mL× 1管 |
說明書 | 1份 |
儲存條件與保質(zhì)期:2~8℃條件下儲存,有效期為12個月。
適用儀器:
1. PCR儀器或金屬浴恒溫器,如果檢測樣品為DNA樣品,水浴鍋即可。
2. 高速離心機,樣品的前處理需要用高速離心機做分離。
樣品富集:
1. 樣品前處理:取250 mL待檢水樣進行抽濾,濾膜置于100ml疊氮化物葡萄糖液態(tài)培養(yǎng)基進行前增菌8-12 h,對增菌液中的菌體富集用于LAMP快速檢測。
2. 適用樣品類型:增菌液或者可疑菌落樣品。
3. 待測樣品存放:粗提的待檢DNA樣品保存于-4~0℃,不應該超過24 h;利用試劑盒提取的DNA樣品可在-20℃長期保存,但應避免反復凍融。
糞鏈球菌核酸快速檢測試劑盒使用指南:
1,樣品前處理
A. 樣品增菌液模板DNA的制備:
a) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中,6000 r/min離心5 min,棄上清,50 μL無菌超純水懸浮洗滌沉淀1-2次,6000 r/min離心5 min,完全去除上清;
b) 加入30 μL裂解液,充分懸浮菌體,輕彈管壁消除氣泡,99℃加熱10 min;
c) 12000 r/min離心15 min,上清即為粗提的DNA,可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中,在-20℃下可長期保存。
B. 可疑菌落模板 DNA 的制備:挑取可疑菌落,懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中,后按照上述步驟b)、c)操作。
2,陰、陽性對照和干粉試劑復溶
A. 陰、陽性對照復溶:首次使用時,加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中,待溶解后混勻,-20℃存儲待用。
B. 干粉試劑復溶:取出凍干粉試劑,按照需求剪取n個檢測試劑管(n=待檢測樣品數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照),每管加入20 μL復溶液,完全溶解后待用。
3,擴增反應
A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器,設置到64℃待用;
B. 向上述已加入復溶液的n個反應管中各加入顯色指示劑2.5 μL;
C. 向上述已加入復溶液的n個反應管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2.5 μL,蓋緊蓋子;
D. 將所有的反應管置于恒溫儀器中,恒溫64℃反應50 min。
4,結果判讀:反應結束后,建議在自然光線充足的環(huán)境條件下,將樣品置于白色背景下觀察結果,陰性對照檢測試劑管呈淡橙色,陽性對照檢測試劑管呈熒光綠,待測樣品反應管以此作為對照進行判讀,若陰陽對照反應管任一結果與上述情況不符,則本次檢測結果無效,應重新檢測或與產(chǎn)品技術支持聯(lián)系。
LAMP檢測操作指南
LAMP使用方法
更多恒溫熒光法核酸快速檢測試劑盒 產(chǎn)品列表:
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 用途 |
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