副溶血性弧菌細(xì)菌生化鑒定盒(18種×5次)(SN/T 0173-2010)
一)整套試劑及用品
鑒定生化反應(yīng)的24種試劑(表1)、5瓶0.85%無菌生理鹽水、1瓶0.5 McFarland的濁度管、5支一次性吸管。
二)西林瓶的使用方法
開啟西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在無菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開鋁蓋，撕開鋁蓋，打開西林瓶膠塞(如圖1)。所有的西林瓶在使用后均高壓滅菌后方可棄去。
三)副溶血性弧菌生化鑒定盒的詳細(xì)使用方法
注意：如有特殊的接種方式、培養(yǎng)時(shí)間、溫度或培養(yǎng)方式，請?jiān)斠娒糠N生化鑒定管附帶的使用說明。
副溶血性弧菌為革蘭氏陰性無芽胞桿菌，易呈多形態(tài)，有棒狀、弧狀、卵圓狀、球狀、絲狀等，排列不規(guī)則，一般大小為0.3～0.7μm×1～2μm，單端一根鞭毛，有動(dòng)力，運(yùn)動(dòng)活潑，兩端濃染，在固體培養(yǎng)條件下能生長周鞭毛。菌落常為隆起，圓形，稍渾濁不透明，表面光滑，濕潤，不產(chǎn)生色素。
挑取平板分離的可疑菌落劃線接種3%NaCl胰蛋白胨大豆瓊脂平板35－37℃培養(yǎng)18－24h，革蘭氏染色鏡檢，并將新鮮菌苔置于已配備的無菌生理鹽水中，與0.5 McFarland的濁度管比濁，將菌懸液制備成0.5McFarland ( 約108cfu/mL )，用吸管吸取2滴（約0.06mL）菌懸液加入每種微量生化管內(nèi)。將已接種的西林瓶再套上膠塞，一般采用全加塞（如圖2左兩瓶所示），特殊情況在下表注明采用半加塞（如圖2右兩瓶所示），直立于內(nèi)托的凹槽內(nèi)（如圖2），或放置于合適的瓶架中，于35－37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果觀察見表1。
注意：如有特殊的接種方式、培養(yǎng)時(shí)間、溫度或培養(yǎng)方式，請?jiān)斠娒糠N生化鑒定管附帶的使用說明。
表1
產(chǎn)品名稱 | 結(jié)果判定 | 結(jié)果觀察 溫度、時(shí)間（小時(shí)） | 使用說明 | |
陽性 | 陰性 | |||
氧化酶試劑 | 藍(lán)紫色 | 不變色 | 30秒 | 滴加1滴試劑到一小塊潔凈濾紙上，以剛剛浸濕為宜；用玻棒或接種環(huán)（鉑或塑料）挑取適量新鮮菌苔涂在紙片上。 |
1%NaCl三糖鐵瓊脂 | 產(chǎn)氣有氣泡， 產(chǎn)酸變黃色， 產(chǎn)硫化氫變黑色， 有動(dòng)力擴(kuò)散生長 | 無氣泡， 不變色 無擴(kuò)散生長 | 35－ | 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺，穿刺完畢后在斜面上劃“之”字形接種，豎立培育。西林瓶半加塞（如圖2右兩瓶所示）后豎立培育。 |
|
無鹽胨水、3％NaCl胨水、6％NaCl胨水、8％NaCl胨水、10％NaCl胨水 | 生長 | 不生長 | 35－ |
|
|
3%NaCl蔗糖 | 黃色 | 紫色 | 35－ |
|
1%NaCl賴氨酸脫羧酶 1%NaCl鳥氨酸脫羧酶
|
試驗(yàn)管藍(lán)綠色， 對照管變黃 | 試驗(yàn)管與對照管均變黃 | 35－ | 每株被檢菌應(yīng)同時(shí)接種氨基酸對照管一支，并加滅菌液體石蠟3－4滴覆蓋培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)18－24小時(shí)，未見陽性結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)4天，再做最終結(jié)果判定。 |
1%NaCl精氨酸雙水解酶 |
試驗(yàn)管藍(lán)綠色， 對照管變黃 | 試驗(yàn)管與對照 管均變黃色 | 35－ | 同上，同時(shí)接種氨基酸對照管一支，并加滅菌液體石蠟3－4滴覆蓋培養(yǎng)基表面。試驗(yàn)管變藍(lán)綠色，對照管變黃為陽性，兩管均為黃色為陰性，作假單胞菌屬鑒定時(shí)不需覆蓋液體石蠟。 |
β－半乳糖苷（ONPG） | 深黃色 | 淡黃色或無色 | 35－ |
|
3%胰蛋白胨大豆瓊脂斜面（ | 生長 | 不生長 |
| |
|
OF( Hugh-leifson) |
|
| 35－ | 被檢菌同時(shí)接種兩支生化管，其中一支加滅菌液體石蠟5-8滴覆蓋表面。兩支管均為黃色判斷為發(fā)酵型細(xì)菌；加石蠟管不變黃，而未加石蠟管變黃為氧化型細(xì)菌；兩支管均不變黃為產(chǎn)堿型細(xì)菌。 |
V-P 半固體 | 動(dòng)力：擴(kuò)散生長，VP：滴加VP試劑后變紅色 | 動(dòng)力：無擴(kuò)散生長， VP：滴加VP試劑后變紅色 | 35－ | 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺接種，豎立培育。 培養(yǎng)后依次加入8滴VP試劑甲液及4滴乙液，混勻，再培養(yǎng)10－20分鐘觀察結(jié)果。 |
1%NaCl蛋白胨水 | 紅色 | 不變色 | 35－ | 西林瓶西林瓶半加塞（如圖2右兩瓶所示）培養(yǎng)后加靛基質(zhì)試劑2-3滴，立即觀察結(jié)果。 |
備注：本鑒定盒是按照環(huán)凱產(chǎn)品目錄中的品種成份從左到右的順序擺放。
四）副溶血性弧菌的生化特性見表2
表2 副溶血性弧菌的生化性狀
試驗(yàn)項(xiàng)目 | 結(jié)果 |
革蘭氏染色鏡檢 | 陰性，無芽胞，呈棒狀、弧狀、卵圓狀 |
氧化酶 | + |
3%NaCl三糖鐵瓊脂 | 底層變黃不變黑，不產(chǎn)氣，斜面不變色或紅色加深，穿刺接種處擴(kuò)散生長 |
無鹽胨水 | －微弱生長 |
3% NaCl胨水 | + |
6% NaCl胨水 | + |
8% NaCl胨水 | + |
10％NaCl胨水 | －或微弱生長 |
3%NaCl蔗糖 | + |
靛基質(zhì) | + |
3%NaCl賴氨酸脫羧酶 | + |
3%NaCl賴氨酸脫羧酶 | + |
3%NaCl精氨酸雙水解酶 | － |
V-P | － |
動(dòng)力 | + |
β－半乳糖苷（ONPG） | － |
+ | |
OF ( Hugh-leifson) | 不分解 |
