細菌新型生化鑒定管使用說明
―― 070040 大腸埃希氏菌O157:H7生化鑒定盒（12種×10次）管
一）大腸埃希氏菌O157:H7生化鑒定盒 整套試劑及用品
鑒定生化反應的12種試劑及配套試劑5種（表1）、0.85%無菌生理鹽水10瓶、0.5 McFarland的濁度管1瓶、一次性吸管10支。
二）生化管的使用方法
開啟西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在無菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開鋁蓋，撕開鋁蓋，打開西林瓶膠塞（如圖1）。所有的西林瓶在使用后均高壓滅菌后方可棄去。
三）大腸埃希氏菌O157：H7生化鑒定盒的詳細使用方法
將疑是大腸埃希氏菌O157：H7的新鮮菌苔置于已配備的無菌生理鹽水中，與0.5 McFarland的濁度管比濁，將菌懸液制備成0.5McFarland ( 約108cfu/mL )， 37℃培養(yǎng)18－24h，用吸管吸取2滴（約0.06mL）菌懸液加入每種微量生化管內(nèi)。將已接種的西林瓶再套上膠塞，一般采用全加塞（如圖2左兩瓶所示），特殊情況在下表注明采用半加塞（如圖2右兩瓶所示），直立于內(nèi)托的凹槽內(nèi)（如圖2），或放置于合適的瓶架中，于35－37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果觀察見表1。注意：如有特殊的接種方式、培養(yǎng)時間或培養(yǎng)方式，請詳見每種生化鑒定管附帶的使用說明。
| 表1 | |||||
| 產(chǎn)品名稱 | 結(jié)果判定 | 培養(yǎng)時間（小時） | 使用說明 | ||
| 陽性 | 陰性 | ||||
| 山梨醇 | 黃色 | 紫色 | 18-24 | ||
| 纖維二糖 | |||||
| 棉子糖 | |||||
| 蛋白胨水 | 紅色 | 不變色 | 24 | 培養(yǎng)后加靛基質(zhì)試劑2-3滴，立即觀察結(jié)果。 | |
| 西蒙氏檸檬酸鹽 | 藍色 | 不變色 | 24-48 | 西林瓶半加塞(如圖2右兩瓶所示)用接種針挑取新鮮菌苔在斜面上劃“之”字形接種，豎立培育。 | |
| 鳥、賴氨酸脫羧酶 | 試驗管藍綠色，對照管變黃 | 試驗管與對照管均變黃 | 18－24 | 每株被檢菌應同時接種氨基酸對照管一支，并加滅菌液體石蠟5-8滴覆蓋培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)18－24小時，未見陽性結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)48小時，再做最終結(jié)果判定。 | |
| 半固體瓊脂 | 擴散生長 | 無擴散生長 | 24-48 | 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺接種，豎立培育。 | |
| 三糖鐵瓊脂 | 產(chǎn)氣 | 有氣泡 | 無氣泡 | 24 | 西林瓶半加塞（如圖2右兩瓶所示）用接種針挑取新鮮菌苔穿刺，穿刺完畢后在斜面上劃“之”字形接種，豎立培育。 |
| 分解蔗糖、（或）乳糖 | 斜面和底層變黃色 | 不變色 | |||
| 分解葡萄糖 | 底層變黃，斜面不變色或者紅色加深 | 不變色 | |||
| 產(chǎn)H2S | 變黑色 | 不變色 | |||
| 葡萄糖磷酸鹽胨水 | MR | 紅色 | 不變色 | 24-48 | 培養(yǎng)后加MR試劑2－3滴，立即觀察結(jié)果。 |
| VP | 紅色 | 不變色 | 48 | 培養(yǎng)后依次加入10滴VP試劑甲液及4滴乙液，混勻，再培養(yǎng)10－20分鐘觀察結(jié)果。 | |
| 備注：本鑒定盒是按照環(huán)凱產(chǎn)品目錄中的品種成份從左到右的順序擺放。 | |||||
四）大腸埃希氏菌O157：H7的生化鑒定程序（見下圖）和生化鑒定特征（見表2）
大腸埃希氏菌O157:H7生化鑒定程序圖：
| 表2 大腸埃希氏菌O157：H7的生化特征 | |
| 試驗項目 | 結(jié)果判定 |
| 山梨醇 | 陰性或遲緩 |
| 纖維二糖 | 陰性 |
| 棉子糖 | 陽性 |
| 蛋白胨水 | 陽性 |
| 西蒙氏枸櫞酸鹽 | 陰性 |
| 鳥氨酸脫羧酶 | 陽性 |
| 賴氨酸脫羧酶 | 陽性 |
| 半固體瓊脂 | 有動力或無動力 |
| 三糖鐵瓊脂 | 底及斜面呈黃色H2S陰性 |
| 葡萄糖磷酸鹽胨水 | MR 陽性 VP 陰性 |
凡符合上述大腸埃希氏菌O157：H7生化反應的純菌落，經(jīng)用抗E.coli O157：H7標準血清或EHEC O157：H7乳膠凝集試劑測試呈陽性結(jié)果，即可報告為該食品試樣中檢出大腸埃希氏菌O157：H7。
