產(chǎn)品名稱：植物DNA快速純化試劑盒（硅膠膜柱法）
英文名稱：Plant gDNA purification kit（Silica membrane）
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
| TQ004D1 | 植物DNA快速純化試劑盒（硅膠膜柱法） | 100次/盒 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：用于植物樣本或真菌基因組DNA的小量提取。其原理是利用液氮研磨和熱裂解相結(jié)合充分釋放基因組DNA，用氯仿抽提使蛋白、多糖和未裂解部分沉淀，使用硅膠膜離心過濾可逆吸附基因組DNA，洗除蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)后，最后洗脫獲得高純度基因組DNA。使用本試劑盒提取的植物樣本DNA可用于各種常規(guī)分子實(shí)驗(yàn)操作，包括酶切、PCR、分子雜交等實(shí)驗(yàn)。
儲(chǔ)存條件及有效期：室溫保存，有效期1年，若長(zhǎng)時(shí)間不使用可放置2~8℃保存（儲(chǔ)存過程中若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前將其在室溫放置一段時(shí)間或65℃條件下溫育，待充分溶解后搖勻即可使用）。
樣本類型：新鮮植物樣本、真菌菌絲等。
植物DNA快速純化試劑盒（硅膠膜柱法）試劑盒組成：
| 序號(hào) | 產(chǎn)品組成 | 規(guī)格 |
| 1 | Buffer PLB | 76mL |
| 2 | Buffer PBB | 76mL |
| 3 | PW1 | 22mL(使用前加33mL無(wú)水乙醇) |
| 4 | PW2×2瓶 | 15mL/瓶(使用前每瓶加62mL無(wú)水乙醇) |
| 5 | Elution buffer | 10mL |
| 6 | DNA硅膠膜吸附柱 | 100套 |
| 7 | 使用說(shuō)明書 | 1 份 |
植物DNA快速純化試劑盒（硅膠膜柱法）試劑盒 使用方法：
● 初次使用前請(qǐng)?jiān)赑W1和PW2中加入推薦量的無(wú)水乙醇，參見瓶身標(biāo)簽或使用說(shuō)明書。研磨樣品前可先將Buffer PLB放入65℃水浴鍋預(yù)熱。
1，用液氮把植物/真菌樣品研磨成粉末，轉(zhuǎn)移50~100 mg 新鮮/凍藏樣品或15~40 mg干燥樣品至1.5 mL離心管中；
2，立即吸取預(yù)熱至65℃的Buffer PLB 700 μL至研磨后的樣品中，劇烈渦旋使樣品充分分散，65°C水浴15分鐘，期間手動(dòng)顛倒混勻3次；
注：處理復(fù)雜樣品，如容易氧化褐變的樣本，加入β-巰基乙醇(自配)至 Buffer PLB 中，終濃度為0.1%(V/V)，極難提樣品可加至2%(V/V)，以提高裂解液的抗氧化能力。
3，加入700 μL氯仿至樣品中，渦旋混勻10秒；
注：處理富含多酚或淀粉的植物/真菌組織，可在第3步前，用酚:氯仿=1:1 進(jìn)行等體積抽提。
4，室溫下，12,000×g離心5分鐘，小心轉(zhuǎn)移上清液至新離心管中；
注：若需徹底去除RNA，加入10 μL RNase A至上清液中，顛倒混勻，室溫放置5~10分鐘。
5，加入700 μL Buffer PBB 至上清中，顛倒混勻15次；
6，把DNA柱裝在收集管中，轉(zhuǎn)移一半體積混合液至柱子中，12,000×g離心1分鐘。
7，倒棄濾液把柱子裝回收集管，把剩余混合液轉(zhuǎn)移至柱子中，12,000×g離心1分鐘。
8，倒棄濾液把柱子裝回收集管，加入500 μL Buffer PW1至柱子，12,000×g離心1分鐘。
9，倒棄濾液把柱子裝回收集管，加入700 μL Buffe PW2至柱子中，靜置1分鐘后12,000×g離心1分鐘。
10，倒棄濾液把柱子裝回收集管，加入700 μL Buffer PW2至柱子中，靜置1分鐘后12,000×g離心1分鐘。
11，倒棄濾液把柱子裝回收集管，12,000×g離心2分鐘去除柱子中殘留的乙醇。
12，將柱子轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中，加入50~100 μL預(yù)熱到65°C Elution buffer至柱子的膜中央。室溫靜置4分鐘，12,000×g離心1分鐘。
● 丟棄DNA結(jié)合柱，把得到的DNA溶液保存于-20℃。Elution buffer可用無(wú)菌去離子水替代，但pH值應(yīng)在8.0~8.5。
● 將Elution buffer預(yù)熱到65℃使用，可提高基因組DNA得率。
● 可將洗脫得到的溶液再次吸出滴加吸附柱中央，靜置幾分鐘后再次離心收集可提高基因組DNA提取得率。
純度及濃度檢測(cè)分析：
1. 提取得到的真菌基因組DNA可用紫外分光光度計(jì)測(cè)量濃度與純度。
2. DNA在OD 260處有明顯的吸收峰，在此條件下，1 OD值的光密度相當(dāng)于雙鏈DNA濃度為50 μg/mL；單鏈DNA或RNA為40 μg/mL；寡核苷酸為20 μg/mL。
3. OD260/280=1.7~1.9，如果A260/280≤1.7或比值過低，表示受到蛋白（芳香族）或酚類物質(zhì)污染，需要純化樣品。若DNA樣品中A260/280>2.0表明樣品有RNA或DNA降解。
4. Elution buffer使用去離子水時(shí)候，OD260/280會(huì)偏低，但不表示純度低。
植物DNA快速純化試劑盒（硅膠膜柱法）試劑盒 使用注意事項(xiàng)：
1. 本試劑盒提取使用的器皿、移液器等均應(yīng)為專用，離心管、槍頭等一次性耗材需進(jìn)行高壓滅菌。操作人員應(yīng)穿戴潔凈工作服、口罩、帽子、使用一次性無(wú)粉手套。
2. 盡量使用新鮮樣品，以降低基因組DNA的降解風(fēng)險(xiǎn)。
3. 加入PLB前應(yīng)預(yù)熱到65℃，以免影響提取效果。
4. 裂解液注意不要直接接觸皮膚，如有接觸請(qǐng)用大量清水沖洗。
5. 漂洗液使用后蓋緊蓋子，以免乙醇揮發(fā)影響抽提效果。
6. 如果基因組DNA需長(zhǎng)期保存，建議使用Elution buffer洗脫，分裝保存于-20℃或-80℃。
7. 請(qǐng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書操作步驟進(jìn)行，不同批號(hào)的試劑若無(wú)特殊說(shuō)明，請(qǐng)勿混合使用，并保證在有效期內(nèi)使用該試劑盒，因操作不當(dāng)導(dǎo)致的基因組DNA提取效果不佳，本公司概不負(fù)責(zé)。
8. 妥善處理所有樣本和試劑材料，徹底清潔和消毒操作臺(tái)面。
